الفرق الرئيسي - RT PCR مقابل QPCR
تفاعل البوليميراز المتسلسل هو تقنية تستخدم لتضخيم منطقة معينة من الحمض النووي في المختبر. نظرًا لاختراع Kary Mullis لهذه التقنية في عام 1983 ، أصبح العلماء قادرين على إنتاج آلاف إلى ملايين النسخ من أجزاء معينة من الحمض النووي لأغراض البحث. لقد أصبح حاليًا أسلوبًا شائعًا ويتم إجراؤه بشكل روتيني في المختبرات السريرية والبحثية لمجموعة متنوعة من التطبيقات. هناك اختلافات في تقنية PCR التقليدية مثل RT PCR ، PCR المتداخلة ، PCR متعدد الإرسال ، Q PCR ، RT-QPCR ، إلخ. RT PCR و Q PCR هما نوعان مهمان من PCR. يتمثل الاختلاف الرئيسي بين RT PCR و Q PCR في أن RT PCR يستخدم للكشف عن التعبير الجيني من خلال إنشاء نسخ الحمض النووي التكميلي (cDNA) من RNA بينما يستخدم Q PCR لقياس منتجات PCR كميًا في الوقت الفعلي باستخدام الأصباغ الفلورية.
ما هو RT PCR؟
تفاعل البوليميراز المتسلسل للنسخ العكسي (RT PCR) هو متغير من تفاعل البوليميراز المتسلسل الذي يستخدم للكشف عن تعبير الحمض النووي الريبي. إنها طريقة مهمة للغاية للكشف عن تعبير الرنا المرسال في الأنسجة. يتم استخدام RT PCR عندما تكون المادة الأولية للعينة هي RNA. في RT PCR ، يتم تحويل قالب mRNA أولاً إلى DNA تكميلي. يتم تحفيز هذه الخطوة بواسطة إنزيم النسخ العكسي وتُعرف العملية باسم النسخ العكسي. ثانيًا ، يتم استخدام PCR التقليدي لـ cDNA المركب حديثًا للتضخيم.
RT PCR هي تقنية حساسة للغاية تتطلب كمية صغيرة نسبيًا من عينة الحمض النووي الريبي. يستخدم RT PCR بشكل شائع في تشخيص وقياس أنواع الحمض النووي الريبي ، وخاصة فيروسات RNA مثل فيروس نقص المناعة البشرية وفيروس التهاب الكبد C.
الشكل 01: تقنية RT PCR
ما هو QPCR؟
الكمي PCR (QPCR) هو متغير من PCR الذي يستخدم لقياس كمية منتجات PCR. يشار إليه أيضًا باسم تفاعل البلمرة المتسلسل في الوقت الفعلي لأنه يقيس تضخيم الوقت الفعلي باستخدام آلة PCR في الوقت الفعلي. إنها طريقة مناسبة لتحديد مقدار التسلسل المستهدف أو الجين الموجود في العينة. الميزة المثيرة للاهتمام لـ QPCR هي أنها تجمع بين كل من التضخيم والتقدير الحقيقي في خطوة واحدة. لذلك ، يمكن التخلص من الحاجة إلى الرحلان الكهربائي للهلام في الكشف عن طريق تقنية QPCR. يستخدم QPCR الأصباغ الفلورية لتسمية منتجات PCR أثناء تفاعلات PCR التي تؤدي في النهاية إلى القياس الكمي المباشر. عندما تتراكم منتجات PCR ، تتراكم إشارات الفلورسنت أيضًا وسيتم قياسها بواسطة آلة الوقت الحقيقي. يمكن دمج QPCR مع RT PCR. تُعرف باسم RT - QPCR أو QRT - PCR وتعتبر الطريقة الأكثر قوة وحساسية وكمية للكشف عن مستويات الحمض النووي الريبي في الخلايا أو الأنسجة.
SYBR Green و Taqman طريقتان مستخدمتان لاكتشاف أو مشاهدة عملية تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي. يتم تنفيذ طريقة SYBR Green باستخدام صبغة فلورية تسمى SYBR green وتكتشف التضخيم عن طريق ربط الصبغة لإنتاج DNA مزدوج تقطعت بهم السبل. يتم تنفيذ Taqman باستخدام مجسات مزدوجة العلامات ويكتشف التضخيم عن طريق تحلل المسبار بواسطة Taq polymerase وإطلاقات الفلوروفور كما هو موضح في الشكل 02. ترصد كلتا الطريقتين التقدم المحرز في عملية التضخيم والإبلاغ عن كمية المنتج في الوقت الفعلي
يحتوي تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي على مجموعة متنوعة من التطبيقات مثل القياس الكمي للتعبير الجيني ، و microRNA وتحليل RNA غير المشفر ، والتنميط الجيني SNP ، واكتشاف متغيرات رقم النسخ ، واكتشاف الطفرات النادرة ، واكتشاف الكائنات المعدلة وراثيًا ، واكتشاف العوامل المعدية ، إلخ
الشكل 02: تقنية PCR الكمية
ما هو الفرق بين RT PCR و QPCR؟
RT PCR مقابل QPCR |
|
| RT PCR هي تقنية تستخدم لاكتشاف التعبير الجيني عن طريق التضخيم. | QPCR هي تقنية تضخيم الحمض النووي وتقدير منتجات PCR في الوقت الفعلي. |
| مشاركة إنزيم النسخ العكسي | |
| إنزيم النسخ العكسي يستخدم لـ RT PCR. | إنزيم النسخ العكسي لا يستخدم لـ QPCR. |
| استخدام الجزيئات الفلورية | |
| لا تستخدم الأصباغ أو المجسات ذات العلامات الفلورية في RT PCR. | تستخدم الأصباغ أو المجسات ذات العلامات الفلورية في QPCR. |
| القياس الكمي لمنتج PCR | |
| ما لم يقترن بـ QPCR ، فإن RT PCR لا يحدد منتج PCR. | QPCR قم بقياس منتج PCR كمياً. |
| مادة البداية | |
| مادة البداية هي mRNA. | مادة البداية هي الحمض النووي. |
| توليف [كدنا] | |
| يتم إنتاج الحمض النووي التكميلي أثناء RT PCR. | لا يتم إنتاج الحمض النووي التكميلي خلال QPCR. |
ملخص - RT PCR مقابل QPCR
RT PCR و QPCR هما نسختان من PCR التقليدي. يتم تنفيذ تقنية RT PCR لعينات mRNA وهي مدفوعة بالنسخ العكسي وإنتاج cDNA.يستخدم QPCR لتحديد منتجات PCR أثناء الدورات الحرارية في الوقت الحقيقي باستخدام أصباغ الفلورسنت أو المجسات المسمى. في QPCR ، يتم تمثيل كمية منتج PCR بإشارات الفلورسنت المنبعثة من العينة. يستخدم RT PCR بشكل شائع كعملية تضخيم بينما يستخدم QPCR بشكل شائع كعملية تقدير كمي. هذا هو الفرق بين RT PCR و QPCR.
