PCR مقابل PCR في الوقت الفعلي
تفاعل البوليميراز المتسلسل أو تفاعل البوليميراز المتسلسل هو اكتشاف ثوري في علم الأحياء الجزيئي الحديث ، والذي تم تطويره لأول مرة بواسطة الكيميائي كاري موليس في عام 1983. وهو يسمح بتضخيم تسلسل واحد في الحمض النووي المعقد للتحليل. الفكرة الأساسية لـ PCR هي أن اثنين من البادئات ، المكملتين للخيوط المعاكسة لتسلسل الحمض النووي ، موجهان نحو بعضهما البعض ؛ تنتج البادئات خيوطًا تكميلية تحتوي كل منها على مادة أولية أخرى. وبالتالي ، تكون النتيجة كمية كبيرة من التسلسل المقابل للحمض النووي الموجود بين البادئين. يستخدم إنزيم بوليميراز الدنا لتمديد البادئات في تفاعل البوليميراز المتسلسل.بوليميراز DNA هو إنزيم قابل للحرارة ، وله القدرة على البقاء في درجات حرارة عالية (94 إلى 95 درجة مئوية) يستخدم لتمسخ قالب الحمض النووي.
يتضمن تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) ثلاث خطوات ، وهي الجولات المتكررة من التمسخ ، وتسخين المواد الأولية ، وتوليف الحمض النووي. يتم استخدام آلة التدوير الحراري لإجراء هذا التفاعل بحيث يمكن برمجتها لتغيير درجات الحرارة بسرعة وبدقة. تطبيقات PCR هي التحقيقات الجنائية ، وبصمة الحمض النووي ، والكشف عن مسببات الأمراض ، وتحليل الحمض النووي للأنواع البشرية المبكرة.
ما هو PCR التقليدي؟
هناك ثلاث مراحل رئيسية من تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي ، وهي ؛ مرحلة تضخيم الحمض النووي وفصل PCR وكشف المنتجات. عادة ما يتم فصل أجزاء الحمض النووي عن طريق الرحلان الكهربائي لهلام الاغاروز. يتم تلطيخ المنتجات بعد ذلك ببروميد الإيثويد. أخيرًا ، يتم الكشف عن طريق تصور العصابات على المواد الهلامية تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية. لذلك ، لا يتم التعبير عن النتائج النهائية لـ PCR التقليدي كأرقام.عادةً ما يكون PCR التقليدي قادرًا فقط على اكتشاف معلمة واحدة.
ما هو PCR في الوقت الفعلي؟
يمكن لـ PCR في الوقت الفعلي اكتشاف تضخيم المنتجات ، حيث يتم تصنيع المنتجات. مع تطور التكنولوجيا ، أصبح تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) أسلوبًا شائعًا للغاية ، خاصةً للكشف عن البكتيريا في الأطعمة والتعرف عليها. يستخدم PCR في الوقت الحقيقي نظام صبغة فلورية وجهاز تدوير حراري مزود بقدرة الكشف عن الفلورسنت.
ما الفرق بين تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي وتفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي؟
• PCR التقليدي يستغرق وقتًا طويلاً لأنه يستخدم الرحلان الكهربائي للهلام لتحليل منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل المضخم. في المقابل ، يستغرق تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي وقتًا أقل حيث يمكنه اكتشاف التضخمات أثناء المراحل الأولى من التفاعل.
• يجمع تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي البيانات في مرحلة النمو الأسي لـ PCR بينما يجمع تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي البيانات عند نقطة نهاية التفاعل.
• قد لا تكون نتائج نقطة النهاية لتقرير تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي دقيقة للغاية ، لكن نتائج تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي دقيقة للغاية.
• تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي أكثر حساسية من تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) التقليدي.
• دقة PCR التقليدية ضعيفة جدًا بينما يمكن لـ PCR في الوقت الفعلي اكتشاف تغييرات طفيفة جدًا بسبب الدقة العالية.
• لاكتشاف نقطة النهاية في PCR التقليدي نطاقًا ديناميكيًا قصيرًا بينما يحتوي اكتشاف PCR في الوقت الفعلي على نطاق ديناميكي واسع.
• على عكس PCR التقليدي ، توجد تقنيات الاكتشاف الآلي في تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي.
• تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) التقليدي متطور للغاية ويستهلك الكثير من العمالة أكثر من تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي.
• على عكس تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي ، لا يمكن لـ PCR التقليدي التمييز بين البكتيريا الحية والميتة.
• يستخدم تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي نظام الصبغة الفلورية للكشف عن المنتجات بينما يستخدم تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي بروميد الإيثيديوم وضوء الأشعة فوق البنفسجية لتصور النطاقات في وسط هلام الاغاروز.
