الفرق الرئيسي - الاستنساخ مقابل الاستنساخ الفرعي
الاستنساخ والاستنساخ الفرعي هي إجراءات بيولوجية جزيئية تخلق خلايا أو كائنات حية متطابقة وراثيًا تحمل الحمض النووي أو الجين محل الاهتمام. الاستنساخ هو تقنية تتضمن إدخال الجين المهتم أو الحمض النووي في ناقل ، وتكرارها داخل بكتيريا مضيفة ، وإنتاج الخلايا أو الكائنات الحية التي هي نسخ طبق الأصل من التركيب الجيني. الاستنساخ الفرعي هو تقنية تتضمن إدخال الجين المعني ، والذي يتم إدخاله بالفعل في ناقل ، في ناقل ثانوي ، وتكرارها داخل بكتيريا مضيفة ، وإنتاج نسخ متطابقة وراثيًا من الخلايا أو الكائنات الحية.يتمثل الاختلاف الرئيسي بين الاستنساخ والاستنساخ الفرعي في أنه في الاستنساخ ، فإن الجين المعني ، بمجرد ربطه في ناقل ، يواصل عملية الاستنساخ بينما ، في الاستنساخ الفرعي ، يتم فصل الجين المستنسخ بالفعل عن المتجه الأصلي وإدراجه مرة أخرى في متجه المستلم واستمر في العملية.
ما هو الاستنساخ؟
الاستنساخ هو الإجراء الذي ينتج كائنات أو خلايا متطابقة وراثيا. في الطبيعة ، يحدث الاستنساخ بوسائل التكاثر اللاجنسي. عندما لا يكون هناك إعادة تركيب جيني أو تغيير ، تتلقى الخلايا الوليدة نفس التركيب الجيني للوالد. تخلق الكائنات بدائية النواة وحقيقية النواة استنساخًا عن طريق الانشطار الثنائي ، والتبرعم ، والانقسام ، وما إلى ذلك.
الهدف الرئيسي من الاستنساخ الجزيئي هو صنع ملايين النسخ من الخلايا أو الكائنات الحية المتطابقة وراثيًا التي تحمل جزء من الحمض النووي موضع الاهتمام (الجينات بشكل أساسي).يخلق الكائنات الحية بنسخ جينية دقيقة من أخرى. في المقام الأول ، يتم استنساخ جينات معينة في الدراسات الجزيئية للحصول على معلومات هيكلية ووظيفية ولتسلسل الحمض النووي. أيضًا ، لإنتاج بروتينات أو منتجات معينة على نطاق واسع ، يتم استخدام الاستنساخ على نطاق واسع.
إجراء الاستنساخ
الخطوات الأساسية لإجراء الاستنساخ هي كما يلي
- تحديد وعزل الجين المعني. (تضخيم الجين المعني بواسطة PCR).
- تقييد الهضم للجين المعني (تقييد نوكلياز داخلي يقطع الجين).
- هضم تقييد للحمض النووي الناقل. (يتم أيضًا قطع ناقل الحمض النووي باستخدام نفس نوكلياز التقييد).
- إدخال الجين في المتجه وتشكيل الجزيء المؤتلف.
- تحول الناقل المؤتلف إلى بكتيريا مضيفة.
- عزل وتحديد البكتيريا المحولة (يجب أن يحتوي ناقل البلازميد على جين قابل للتحديد ، وهو في الغالب جين مقاوم للمضادات الحيوية لفحص البكتيريا المحولة).
- التعبير الجيني المؤتلف داخل المضيف.
Figure_01: إجراء الاستنساخ
ما هو الاستنساخ الفرعي
الاستنساخ الفرعي هو إجراء لنقل جين مهم من ناقل إلى ناقل آخر لرؤية تعبير الجين لاكتساب الوظيفة المطلوبة للجين. في هذه الطريقة ، يتم تضمين اثنين من النواقل ؛ وهي ناقلات الأصل وناقل الوجهة. يتم نقل الإدخالات المستنسخة مرة أخرى إلى متجه ثانٍ في الاستنساخ الفرعي. الهدف من نقل الجين من الناقل الأول إلى المتجه الثاني هو الحصول على شيء لا يمكن القيام به بواسطة الناقل الأول أو فصل الجين مرة أخرى داخل جزء الحمض النووي المستنسخ بالفعل والتعبير عنه بمفرده. تستخدم إنزيمات التقييد في هذا الإجراء في البداية.
إجراء الاستنساخ الفرعي
الخطوات الأساسية للاستنساخ الفرعي هي كما يلي
- بمساعدة نوكليازات التقييد ، فصل الحمض النووي ذي الأهمية في بلازميد المتبرع (ناقل الأصل).
- تضخيم الحمض النووي للفائدة باستخدام PCR.
- تنقية منتج PCR (الحمض النووي للفائدة) بواسطة الرحلان الكهربائي للهلام.
- فتح البلازميد المتلقي بنفس نوكليازات التقييد المستخدمة لفصل الحمض النووي ذي الأهمية في البلازميد الأصل.
- ربط الحمض النووي محل الاهتمام (الجين) في البلازميد المتلقي لإنشاء البلازميد المستنسخ.
- تحول الناقل المستنسخ إلى بكتيريا مضيفة مختصة.
- فحص الخلايا المحولة
- تنقية DNA البلازميد واستخدام تسلسل الحمض النووي أو التعبير عن الجينات للحصول على المنتجات المرغوبة.
يتم الاستنساخ الفرعي في مناسبات عزل جين واحد من مجموعة الجينات المستنسخة أو عندما يكون الجين المعني مطلوبًا للانتقال إلى بلازميد مفيد لمعرفة الوظيفة الدقيقة للجين المعني.
Figure_02: إجراء الاستنساخ الفرعي
ما الفرق بين الاستنساخ والاستنساخ الفرعي
الاستنساخ مقابل الاستنساخ الفرعي |
|
| الاستنساخ هو الإجراء الذي ينتج كائنات أو خلايا متطابقة وراثيا. | الاستنساخ الفرعي هو إجراء لنقل جين مهم من ناقل إلى ناقل آخر لرؤية تعبير الجين لاكتساب الوظيفة المطلوبة للجين. |
| العملية | |
| افصل الحمض النووي ذي الأهمية عن الكائن الحي وأدخله في ناقل مرة واحدة واستنسخه | يتم فصل الحمض النووي المستنسخ بالفعل عن المتجه الأول وإدخاله في المتجه الثاني واستنساخه. |
| أدخل الحركة عبر المتجهات | |
| لا يتحرك المدخلات (DNA ذات الأهمية) من متجه إلى متجه آخر. | نقل الإدخالات من المتجه الأصل إلى متجه الوجهة. |
ملخص - الاستنساخ مقابل الاستنساخ الفرعي
الاستنساخ يخلق خلايا أو كائنات حية متطابقة وراثيا مع الجين أو الحمض النووي المراد إدخاله. يتم المضي قدمًا من خلال فصل وإدخال الحمض النووي محل الاهتمام في ناقل وتعبير داخل بكتيريا مضيفة. يشترك الاستنساخ الفرعي في خطوات مماثلة مع الاستنساخ. ومع ذلك ، في الاستنساخ الفرعي ، يتم إدخال جزء الحمض النووي المستنسخ بالفعل (الجين المعني) في ناقل وتحويله إلى بكتيريا مضيفة. هذا هو الفرق الرئيسي بين الاستنساخ والاستنساخ الفرعي.
