الفرق الرئيسي - Phusion مقابل Taq Polymerase
إنزيمات DNA polymerases تستخدم على نطاق واسع في تقنيات البيولوجيا الجزيئية وهي موجودة أيضًا بشكل طبيعي في جميع الكائنات الحية التي تخضع لتكرار الحمض النووي. إنها إنزيمات البلمرة الرئيسية التي تنطوي على عملية النسخ المتماثل. إن بوليميراز الدنا قادر على إضافة نيوكليوتيدات إلى الطرف الحر 3 من خيط الدنا ، مما يتسبب في تمديد حبلا جديد. في الوقت الحاضر ، نظرًا لتطورات البيولوجيا الجزيئية في تشخيص الأمراض والتطبيقات الصناعية ، من المهم تصنيع البوليميرات ذات الخصائص المفيدة المختلفة. هذا يزيد من دقة الطريقة ويجعلها تقنية أسرع. Phusion و Taq polymerase هما إنزيمات البوليميراز الحرارية المنتجة تجاريًا والتي تستخدم في التطبيقات الجزيئية الخاصة. Phusion هو بوليميريز DNA معزول من Pyrococcus furiosus ويستخدم بشكل أساسي في تجارب الاستنساخ لزيادة الدقة. Taq DNA Polymerase هو بوليميريز DNA القياسي المستخدم في تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) ، وهو معزول عن البكتيريا المقاومة للحرارة ؛ Thermus aquaticus. الفرق الرئيسي بين الإنزيمين هو مصدر الكائنات الحية الدقيقة. يتم عزل الانصهار من المتطرف ، Pyrococcus furiosus ، بينما يتم عزل Taq polymerase من Thermus aquaticus.
ما هو Phusion؟
بوليميراز DNA Phusion عبارة عن بوليميراز جديد يتم تصنيعه عن طريق عزل الإنزيم من Pyrococcus furiosus ، وهو عتيق شديد الحساسية. تتواجد هذه الميكروبات في ظروف شديدة الحرارة ، مما يجعل البوليميراز بوليميراز عالي الثبات للحرارة. يستخدم بوليميراز الانصهار للحصول على دقة قصوى على البوليميراز الحراري التقليدي ؛ طاق بوليميراز.بوليميراز Phusion قادر على تضخيم قوالب طويلة تصل إلى 7.5 كيلو بايت من الحمض النووي الجيني. تبلغ قدرة البلمرة المثلى لبوليميراز الانصهار 72 0C. يستخدم Phusion أيضًا في استنساخ المنتجات للتسلسل وتحليل التعبير وتحليل الطفرات.
يحتوي بوليميراز DNA Phusion على نشاط نوكلياز خارجي يتراوح بين 3 و 5. وهذا يسمح بمراجعة الخيط المركب حديثًا بعد التركيب. ومن ثم ، يمكن بسهولة إصلاح عدم تطابق النوكليوتيدات. وبالتالي ، لديها معدل خطأ أقل. المزايا العامة لبوليميراز الانصهار هي ؛
- إخلاص شديد
- سرعة عالية ووقت تمديد منخفض
- تفاعلات قوية وتتطلب الحد الأدنى من التحسين
- إنتاجية عالية
الشكل 01: Phusion
العيب الرئيسي لبوليميراز Phusion هو تثبيطه في وجود deoxyuridine triphosphate (dUTP). عندما تتراكم dUTPs في خليط التفاعل ، فإنه قد يثبط إجراءات Phusion polymerase. يتم منع ذلك عن طريق معالجة خليط التفاعل باستخدام dUTPase قبل إضافة الإنزيم. في الوقت الحاضر ، يتم استخدام متغير مقاوم لـ dUTP من بوليميراز الانصهار المعروف باسم Pfu Turbo بدلاً من Phusion polymerase كعلاج لهذه المشكلة.
ما هو طق بوليميراز؟
أحدث اختراع Taq DNA polymerase ثورة في مجال البيولوجيا الجزيئية. لقد حلت مشكلة كبيرة في تضخيم الحمض النووي. إن بوليميراز Taq DNA عبارة عن إنزيم بوليميراز مستقر للحرارة يتم استخراجه وعزله من البكتيريا المحبة للحرارة ، Thermus aquaticus. يؤدي اكتشاف هذه الإنزيمات إلى تطوير تفاعل البوليميراز المتسلسل. سمح هذا الإنزيم باستخدام تفاعل البلمرة المتسلسل في تضخيم الحمض النووي بدلاً من تقنيات الاستنساخ التقليدية الشاقة.يستخدم PCR الآن في التشخيص الجزيئي والمجالات الزراعية والصناعية مع العديد من الاختلافات الجديدة المضافة إلى التقنية.
الشكل 02: طاق بوليميريز
وظائف بوليميريز DNA Taq في نطاق درجة الحرارة المثلى بين 720C - 800C. يتطلب بوليميراز DNA Taq عاملاً مشتركًا ؛ المغنيسيوم لوظيفته. لا يحتوي Taq polymerase على القدرة على التدقيق اللغوي 3 '- 5' ، وبالتالي ، فإن معدل الخطأ في Taq DNA polymerase مرتفع بالمقارنة مع الأنواع الأحدث من بوليميراز DNA مثل Phusion polymerase وما إلى ذلك. ولكن ، تظل شعبية Taq DNA polymerase نفس الشيء في جميع أنحاء عالم العلم بسبب راحة ومرونة الإنزيم.
ما هي أوجه التشابه بين Phusion و Taq polymerase؟
- كل من إنزيمات Phusion و Taq polymerase عبارة عن إنزيمات بلمرة قادرة على إضافة نيوكليوتيدات إلى الطرف الحر 3 من خيط DNA.
- يتطلب كل من بوليميرات الانصهار و Taq تسلسلًا تمهيديًا لبدء البلمرة.
- كلا من بوليميرات الانصهار و Taq مستقران للحرارة.
- يتم استخدام بوليميرات الانصهار و Taq في آليات تفاعل البوليميراز المتسلسل لتضخيم الحمض النووي.
- عند إضافة البوليميراز إلى خليط التفاعل ، تتم إضافة بوليميراز Phusion و Taq أخيرًا لضمان كفاءة الإنزيم.
- يتم تصنيع كل من بوليمرات الانصهار و Taq تجارياً لأغراض تجريبية في البيولوجيا الجزيئية.
- تتطلب بوليمرات Phusion و Taq عامل مساعد لإكمال وظيفتها.
ما هو الفرق بين Phusion و Taq Polymerase؟
Phusion مقابل Taq Polymerase |
|
| Phusion هو بوليميريز DNA معزول من Pyrococcus furiosus ويستخدم بشكل أساسي في تجارب الاستنساخ لزيادة الدقة. | Taq DNA Polymerase هو بوليميريز الحمض النووي القياسي المستخدم في تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) ، وهو معزول عن البكتيريا المقاومة للحرارة ، Thermus aquaticus. |
| مصدر الكائن | |
| Phusion مستخرج من العتائق شديدة الحساسية - Pyrococcus furiosus. | تمتد هذه الأعمال الأدبية من فترة الاستعمار إلى فترة إنهاء الاستعمار. |
| قدرة إثبات القراءة | |
| 3 "- 5" القدرة على قراءة الدليل موجودة في Phusion. | 3 "- 5" القدرة على قراءة الدليل غائبة في Taq polymerase. |
| الإخلاص | |
| الدقة العالية موجودة مع Phusion | طاق بوليميراز يظهر دقة منخفضة. |
| التضخيم | |
| Phusion قادر على تضخيم شظايا الحمض النووي الطويلة. | طاق بوليميراز قادر على تضخيم شظايا DNA أقصر بكثير. |
| تسمم dUTP | |
| يتم إعاقة عمل الانصهار بسبب التراكم الفردي. | Taq polymerase لا يثبطه dUPT. |
ملخص - Phusion مقابل Taq polymerase
Phusion و Taq DNA polymerase هما بوليميراز مستقران للحرارة يستخدمان في تقنيات PCR. Phusion عبارة عن بوليميراز معزول عن البايروكوكوس فوريوسوس ، بينما يتم عزل طق من البكتيريا المقاومة للحرارة Thermus aquaticus.يؤدي اكتشاف بوليميراز DNA Taq إلى اختراع PCR. يتمتع Phusion بالعديد من المزايا على Taq مما جعل Phusion خيارًا أفضل في إنتاج DNA عالي الدقة. ومع ذلك ، لا يزال يستخدم Taq polymerase باعتباره إنزيم البلمرة القياسي في PCR. هذا هو الفرق بين Phusion و Taq polymerase.
