الفرق الرئيسي - RAPD مقابل RFLP
تستخدم الواسمات الجينية في علم الأحياء الجزيئي لتحديد الاختلافات الجينية بين الأفراد والأنواع. يعد تعدد الأشكال المتضخم العشوائي (RAPD) وتعدد الأشكال المقيد (RFLP) من العلامات الجزيئية المهمة المستخدمة بشكل روتيني في المختبرات. يتم إجراء RAPD باستخدام بادئات قليلة النوكليوتيد قصيرة وتعسفية ، ويستند إلى التضخيم العشوائي للمواقع المتعددة في جميع أنحاء قالب DNA للكائن الحي. يتم إجراء RFLP باستخدام نوكلياز داخلي محدد ، ويستند إلى تعدد الأشكال لشظايا التقييد الناتجة والتهجين.يتمثل الاختلاف الرئيسي بين RAPL و RFLP في أن RAPD هو نوع من تقنية PCR يتم إجراؤه بدون معرفة التسلسل المسبق بينما لا يشارك RFLP في PCR ويتطلب معرفة التسلسل المسبق لتنفيذ التقنية.
ما هو RAPD؟
RAPD هو علامة جزيئية مفيدة في علم الأحياء الجزيئي. إنها تقنية سريعة وسهلة. يمكن تعريف RAPD على أنه طريقة ينتج عنها تسلسل DNA متعدد الأشكال نتيجة للتضخيم العشوائي لمواقع متعددة من قالب DNA الهدف. يستخدم RAPD بادئات قليلة النوكليوتيد القصيرة مع تسلسل تعسفي لتضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل. يتم تصنيع الاشعال بشكل مصطنع دون معرفة التسلسل المسبق. ومن ثم فهي تعتبر تقنية سهلة ومفيدة.
الخطوات الرئيسية التالية متضمنة في RAPD.
- استخراج الحمض النووي الهدف
- تضخيم المواقع المتعددة للحمض النووي المستهدف باستخدام البادئات المختارة عشوائيًا
- الرحلان الكهربائي للهلام لمنتجات PCR المضخمة
- تلطيخ بروميد الإيثيديوم وتحديد تعدد الأشكال
نتيجة للاختلاف في التلدين التمهيدي ، يتم إنشاء شظايا مختلفة بأطوال مختلفة أثناء التضخيم. وبالتالي ، تختلف أنماط النطاقات على المواد الهلامية بين الأفراد والأنواع. وهكذا ، يتيح RAPD اكتشاف الاختلاف الجيني بين الكائنات الحية في تحديد الهوية والتمايز.
يتم تطبيق RAPD في دراسات مختلفة للبيولوجيا الجزيئية مثل تحديد الاختلاف الجيني بين الأنواع وثيقة الصلة ، ورسم الخرائط الجينية ، وبصمات الحمض النووي ، وتحديد الأمراض الموروثة ، وما إلى ذلك.
الشكل 01: RAPD
ما هو RFLP؟
تعدد الأشكال لطول جزء التقييد (RFLPs) هو علامة جزيئية مستخدمة في علم الأحياء الجزيئي لتحديد التباين الجيني في تسلسل الحمض النووي المتماثل. إنها أول علامة جينية تم تطويرها لبصمات الحمض النووي. تنتج جميع الكائنات ملامح DNA فريدة عندما يتم تقييدها بأنزيمات تقييدية محددة. يعمل RFLP كأداة مهمة في إنتاج ملفات تعريف DNA فريدة للأفراد واكتشاف التباين الجيني بينهم. عندما يتم هضم عينات الحمض النووي باستخدام نوكليازات داخلية مقيدة محددة ، فإنها تنتج ملفات تعريف DNA مختلفة فريدة لكل فرد. لذلك ، فإن مبدأ هذه الطريقة هو الكشف عن الاختلاف الجيني بين الكائنات الحية عن طريق تقييد الحمض النووي المتماثل مع إنزيمات تقييد محددة وتحليل تعدد الأشكال لطول القطعة عن طريق الرحلان الكهربائي للهلام والنشاف. أنماط التنشيف فريدة لكل كائن حي وتميز الأنماط الجينية المحددة.
الخطوات التالية متضمنة في RFLP.
- عزل كمية كافية من الحمض النووي من العينات
- تجزئة عينات الحمض النووي مع نوكلياز داخلي محدد في تسلسل قصير
- فصل الشظايا الناتجة بأطوال مختلفة بواسطة الاغاروز الكهربائي للهلام.
- نقل ملف تعريف الهلام إلى غشاء بواسطة النشاف الجنوبي
- تهجين الغشاء مع تحقيقات المسمى وتحليل تعدد الأشكال طول الجزء في كل ملف تعريف
RFLP لها تطبيقات مختلفة مثل تشخيص أمراض الوراثة ، ورسم خرائط الجينوم ، وتحديد الهوية الجنائية في دراسات الطب الشرعي ، واختبار الأبوة ، وما إلى ذلك.
الشكل 02: التنميط الجيني RFLP
ما هو الفرق بين RAPD و RFLP؟
RAPD مقابل RFLP |
|
| RAPD عبارة عن علامة جزيئية تعتمد على الاشعال العشوائي و PCR. | RFLP عبارة عن علامة جزيئية تعتمد على إنتاج أجزاء مختلفة من تقييد الطول. |
| النموذج المطلوب | |
| عينات الحمض النووي الصغيرة كافية لتحليل RAPD. | مطلوب كمية كبيرة من عينة الحمض النووي المستخرجة لتحليل RFLP. |
| الوقت | |
| RAPD عملية سريعة. | RFLP عملية تستغرق وقتًا طويلاً. |
| استخدام برايمر | |
| يتم استخدام البادئات العشوائية ويمكن استخدام نفس البادئات لأنواع مختلفة. | تُستخدم تحقيقات خاصة بالأنواع في RFLP للتهجين. |
| الموثوقية | |
| موثوقية التقنية أقل مقارنة بـ RFLP. | RFLP هي تقنية موثوقة. |
| النشاف | |
| RAPD يتضمن النشاف الجنوبي. | النشاف الجنوبي هو خطوة واحدة من RFLP. |
| الكشف عن التباين الأليلي | |
| لا يمكن الكشف عن الاختلافات الأليلية بواسطة RAPD. | يمكن الكشف عن الاختلافات الأليلية بواسطة RFLP. |
| الحاجة لتسلسل المعرفة | |
| لا يتطلب RAPD معرفة التسلسل المسبق. | معرفة التسلسل المسبق مطلوبة لتصميم المجس. |
| PCR | |
| يشارك PCR مع RAPD | لا يتدخل PCR في RFLP. |
| التكاثر | |
| RAPD لديه قابلية استنساخ منخفضة | RFLP لديه قابلية استنساخ عالية مقارنة بـ RAPD. |
ملخص - RAPD مقابل RFLP
RAPD و RFLP هي علامات مهمة تستخدم في البيولوجيا الجزيئية. كلتا الطريقتين قادرتان على اكتشاف الاختلاف الجيني بين الكائنات الحية. يتم إجراء RAPD باستخدام الاشعال العشوائي. يتم إجراء RFLP باستخدام إنزيمات تقييدية محددة. تنتج كلتا الطريقتين ملامح DNA فريدة للكائنات الفردية. يشارك RAPD في خطوات قليلة نسبيًا من RFLP. لكنها تنتج نتائج أقل موثوقية وقابلة للتكرار من RFLP. هذا هو الفرق الرئيسي بين RAPD و RFLP.
