الفرق الرئيسي - ربط بلانت مقابل ربط نهاية لزجة
نوكليازات تقييدية هي إنزيمات محددة تقطع الحمض النووي المزدوج الشريطة (dsDNA). تُعرف أيضًا باسم المقص الجزيئي في علم الأحياء الجزيئي. إنزيمات التقييد قادرة على التعرف على تسلسلات قصيرة محددة من dsDNA المعروفة باسم مواقع التعرف وتشق روابط الفوسفوديستر والهيدروجين لفتح خيوط مزدوجة. نتيجة للانقسام بواسطة هذه الإنزيمات ، يتم إنتاج شظايا الحمض النووي بأنواع مختلفة من النهايات مثل النهايات اللاصقة والنهايات غير الحادة. DNA ligase هو إنزيم يستخدم في البيولوجيا الجزيئية لربط خيطين متجاورين من الحمض النووي عن طريق تكوين روابط جديدة.تُعرف الخطوة باسم الربط ووفقًا لنوع ربط نهاية الحمض النووي ، يمكن الإشارة إليها بربط نهاية حادة وربط نهاية لزجة. يتمثل الاختلاف الرئيسي بين ربط الأطراف غير الحادة واللزجة في أن ربط النهاية غير الحاد يحدث بين شظايا الحمض النووي التي تحتوي على نهايتين غير حادتين بينما يحدث ربط الطرف اللزج بين 5 و 3 بوصات. مقارنةً بربط الأطراف غير الحادة ، فإن ربط الطرف اللاصق يكون أكثر كفاءة وثباتًا.
ما هو ربط نهاية بلانت؟
يمكن لبعض نوكليازات التقييد أن تقطع الحمض النووي في القواعد المعاكسة وتنتج شظايا دنا غير حادة الطرف. تُعرف هذه الإنزيمات بقواطع نهاية حادة ؛ ينشقون مباشرة إلى منتصف موقع التقييد دون ترك قواعد متدلية مفردة عالقة. تُعرف النهايات غير الحادة أيضًا بالنهايات غير المتدلية نظرًا لعدم وجود قواعد متدلية 3 و 5 في النهايات. ينتهي كلا الجدلين من أزواج أساسية في نهايات حادة. إنزيمات القطع غير الحادة الشائعة هي EcoRV HaeIII و AluI و SmaI.
ربط طرف بلانت متورط بين نهايتين غير حادتين. إنه ليس ربط قواعد بارزة. هذا الربط أقل كفاءة من الربط اللاصق. ومع ذلك ، في بعض الحالات ، يصبح الربط غير الحاد أكثر فائدة من ربط الطرف اللزج ، خاصة عند ربط منتجات PCR. يتم إنتاج منتجات PCR دائمًا بنهايات حادة. لا يتطلب ربط النهاية الحادة نهايات تكميلية في الحمض النووي للربط.
الشكل 01: إنتاج نهاية غير حادة بواسطة إنزيم Eco RV
ما هو ربط النهاية اللزجة؟
بعض نوكليازات التقييد قادرة على قطع dsDNA ، تاركًا قطعة متدلية من الحمض النووي أحادي الجديلة في النهاية. تُعرف هذه النهايات بالنهايات اللزجة أو المتدلية. يحدث ربط الطرف اللزج بين جزأين من الحمض النووي اللتين تحتويان على أجزاء متدلية متطابقة لأن النهايات اللاصقة تمتلك قواعد غير متزاوجة وتتطلب قواعد تكميلية لتكوين روابط.وبالتالي ، من الضروري استخدام نفس إنزيم التقييد لكلا مصدري الحمض النووي لإنتاج شظايا الربط المطابقة.
ربط الطرف اللاصق أكثر كفاءة وغالبًا ما يكون مرغوبًا للغاية في عمليات الاستنساخ. هناك العديد من إنزيمات التقييد التي تنتج نهايات لزجة. هم EcoRI و BamHI و HindIII وما إلى ذلك
الشكل 02: الإنتاج النهائي اللزج بواسطة إنزيم Eco RI
ما هو الفرق بين Blunt و Sticky End Ligation؟
ربط بلانت مقابل ربط نهاية لزجة |
|
| يحدث ربط نهاية حادة بين جزأين غير حاد من الحمض النووي. | يحدث ربط الطرف اللزج بين جزأين متطابقين من الحمض النووي بنهايات لزجة. |
| إنزيمات | |
| قواطع نهاية حادة تنتج نهايات حادة. | قواطع نهاية لزجة تنتج نهايات لزجة أو متماسكة. |
| متطلبات مطابقة النهايات | |
| لا يتطلب مطابقة الأجزاء أو القواعد التكميلية. | يتطلب قواعد تكميلية في النهايات لتشكيل أزواج أساسية. |
| كفاءة | |
| هو أقل كفاءة من الربط اللزج | إنه أكثر كفاءة من الربط غير الحاد. |
ملخص - Blunt vs Sticky End Ligation
نوكليازات مقيدة قادرة على تشقق dsDNA وإنتاج شظايا DNA ذات نهايات مختلفة.يتعرفون على تسلسلات محددة ويقيدون الحمض النووي الذي يخلق نهايات لزجة وغير حادة. النهايات اللاصقة لها قواعد غير متزاوجة في نهاية الشظايا. يتم إنشاء نهايات حادة بسبب انقسام مستقيم ولها أزواج قاعدية في النهايات. يتطلب ربط النهاية اللاصقة قطعتين مكملتين من الحمض النووي أحادي الجديلة. يحدث الربط الطرفي الحاد بين أي جزئين طرفيين غير حاد. هذا هو الفرق بين الربط اللاصق وغير الكليل.
