الفرق الرئيسي - AFLP مقابل RFLP
دراسات الحمض النووي لها أهمية كبيرة في فهم وتحديد العلاقات النشوء والتطور وتشخيص الأمراض الوراثية ورسم خرائط جينومات الكائن الحي. تُستخدم أيضًا العديد من التقنيات المرتبطة بتحليل الحمض النووي لتحديد جين معين أو تسلسل الحمض النووي في مجموعة من الحمض النووي غير المعروف. تُعرف باسم الواسمات الجزيئية. تعد تعدد الأشكال لطول الجزء المضخم (AFLP) وتعدد الأشكال المقيد (RFLP) من هذه العلامات الجزيئية (الطرق) التي تم تطويرها في البيولوجيا الجزيئية لاكتشاف الاختلاف الجيني بين الكائنات الحية. كلتا الطريقتين متساويتان في الأهمية ولديهما مزايا وعيوب.الفرق الرئيسي بين AFLP و RFLP هو أن AFLP يتضمن تضخيم PCR انتقائي للحمض النووي المهضوم بينما RFLP لا يتضمن تضخيم PCR انتقائي لشظايا DNA.
ما هو AFLP؟
AFLP (تعدد الأشكال لطول الجزء المضخم) هو أداة مهمة في البيولوجيا الجزيئية ويستخدم على نطاق واسع في تحليل التباين الجيني. يعتمد AFLP على تضخيم PCR المحدد للحمض النووي الجيني المجزأ والكشف عن تعدد الأشكال عن طريق التصوير الشعاعي التلقائي عبر الرحلان الكهربائي للهلام. يساهم AFLP على نطاق واسع في تحديد الاختلافات الجينية في السلالات أو الأنواع وثيقة الصلة بممالك مختلفة بما في ذلك النباتات والحيوانات والبكتيريا والفطريات. يمكن إجراء AFLP بكميات صغيرة من عينات الحمض النووي غير المعروفة. لا يتطلب معرفة التسلسل المسبق وتصميم المجسات.
خطوات AFLP
- عزل الحمض النووي
- هضم الحمض النووي مع نوكليازات تقييدية
- ربط شظايا الحمض النووي المقيدة بمحولات
- تضخيم انتقائي للأجزاء مع مواقع تقييد محددة
- فصل منتجات PCR بواسطة الرحلان الكهربائي للهلام
- تصور مصفوفة الهلام عن طريق التصوير الشعاعي الذاتي
AFLP هي طريقة أكثر حساسية وقابلة للتكرار ويمكن استخدامها في تحديد سمات الحمض النووي للعديد من الأصناف بما في ذلك الفطريات والبكتيريا والنباتات والحيوانات دون معرفة مسبقة بتسلسل الحمض النووي. يساعد في تحديد الاختلافات الطفيفة بين الأفراد في السكان بسبب طبيعته شديدة الحساسية. AFLP مهم أيضًا في رسم خرائط الجينوم ، ودراسات الطب الشرعي ، واختبار الوالدين ، والتنميط الجيني ، وما إلى ذلك.
الشكل 01: AFLP
ما هو RFLP؟
تعدد الأشكال لطول جزء التقييد (RFLPs) هي تقنية تُستخدم للكشف عن الاختلافات الجينية في تسلسل الحمض النووي المتماثل.إنها الطريقة الأولى التي تم تطويرها لتشخيص الحمض النووي. الكائنات الحية لها بصمات فريدة من الحمض النووي أو ملامح الحمض النووي. يعمل RFLP كأداة مهمة لتحليل التباين بين ملامح الحمض النووي للكائنات غير المحددة أو ذات الصلة الوثيقة نظرًا لأن التسلسلات المتماثلة لها مواقع تقييد مختلفة (مواقع) فريدة لكائن حي معين. عندما يتم هضم الحمض النووي المتماثل باستخدام نوكليازات داخلية مقيدة محددة ، فإنه سينتج عنه سمات مختلفة للحمض النووي تكون فريدة لكل فرد. لذلك ، فإن مبدأ هذه الطريقة هو الكشف عن الاختلاف الجيني بين الكائنات الحية عن طريق تقييد الحمض النووي المتماثل مع إنزيمات تقييد محددة وتحليل تعدد الأشكال لطول القطعة عن طريق الرحلان الكهربائي للهلام والنشاف. أنماط التنشيف فريدة لكل كائن حي وتميز الأنماط الجينية المحددة.
خطوات RFLP
- عزل كمية كافية من الحمض النووي من العينات
- تجزئة عينات الحمض النووي مع نوكلياز داخلي محدد في تسلسل قصير
- فصل الشظايا الناتجة بأطوال مختلفة بواسطة الاغاروز الكهربائي للهلام.
- نقل ملف تعريف الهلام إلى غشاء بواسطة النشاف الجنوبي
- تهجين الغشاء مع تحقيقات المسمى وتحليل تعدد الأشكال طول الجزء في كل ملف تعريف
RFLP هي تقنية مهمة للغاية في الكشف عن وراثة المرض واكتشاف مخاطر حدوث المرض بين أفراد الأسرة. يستخدم RFLP بشكل متكرر أيضًا في رسم خرائط الجينوم ، وتحديد المجرمين في الطب الشرعي ، واختبار الأبوة ، وما إلى ذلك. يتطلب RFLP المعرفة المسبقة ببيانات التسلسل لتصميم مجسات للتهجين. كما يتطلب عزل كمية كافية من الحمض النووي من العينة لتحليلها ، وهو أمر صعب في دراسات الطب الشرعي.
الشكل 01: رسم خرائط RRFLP
ما هو الفرق بين AFLP و RFLP؟
ALFP مقابل RFLP |
|
| يتضمن AFLP تضخيم PCR انتقائي للحمض النووي المهضوم. | RFLP لا يتضمن PCR ما لم يكن PCR-RFLP. |
| معرفة التسلسل | |
| معرفة التسلسل المسبق غير مطلوبة. | معرفة التسلسل المسبق مطلوبة لتحقيقات RFLP المصممة. |
| الموثوقية | |
| هذا أكثر موثوقية. | هذا أقل موثوقية مقارنة بـ AFLP. |
| الكفاءة في الكشف عن تعدد الأشكال | |
| هذا له كفاءة أعلى في الكشف عن تعدد الأشكال من RFLP. | هذا أقل كفاءة مقارنة بـ AFLP. |
| التكلفة | |
| هذا مكلف بعض الشيء مقارنة بـ RFLP. | هذا أقل تكلفة بالمقارنة مع AFLP. |
| تطبيقات | |
| تم تطبيق AFLPs لرسم خرائط الجينوم ، وبصمات الحمض النووي ، ودراسات التنوع الجيني ، واختبار الأبوة والطب الشرعي | تحليل RFLP هو أداة مهمة في رسم خرائط الجينوم ، وتوطين الجينات للاضطرابات الوراثية ، وتحديد مخاطر المرض ، واختبار الأبوة. |
ملخص - AFLP مقابل RFLP
AFLP و RFLP هما طريقتان تستخدمان كواسمات جينية لتقييم التنوع وتقييم العلاقات الجينية في البيولوجيا الجزيئية.يعمل AFLP كطريقة فعالة وحساسة للكشف عن تعدد الأشكال الوراثي بين الكائنات الحية من RFLP. ومع ذلك ، على الرغم من أن كلتا الطريقتين لهما كفاءات مختلفة في الكشف عن الاختلافات الجينية ، إلا أنهما لا يزالان يستخدمان لبصمات الحمض النووي وتشخيص الأمراض.
