الفرق الرئيسي - التربسين الدافئ مقابل البارد
التربسين الدافئ والبارد طريقتان تستخدمان في التفصيل الأنزيمي للخلايا في زراعة الخلايا الحيوانية. يعتمد الاختلاف الرئيسي بين التربسين الدافئ والبارد ، كما توحي الأسماء ، على درجة الحرارة التي يضاف فيها التربسين للتفصيل الخلوي. يحدث التربسين الدافئ تحت ظروف درجات حرارة أعلى (36.5 - 370C) بينما يحدث التربسين البارد تحت ظروف درجات الحرارة المنخفضة.
أثناء عملية زراعة الخلايا الأولية للخلايا الحيوانية ، هناك ثلاث طرق رئيسية مستخدمة وأثبتت نجاحها.تشمل الطرق الثلاث التفصيل الميكانيكي للخلايا ، والتفصيل الأنزيمي للخلايا وتقنية النبات الأساسي. التفصيل الأنزيمي للخلايا يؤدي إلى عزل الخلايا ويتم ذلك عن طريق إنزيم التربسين المهين للبروتين. لذلك ، تُعرف هذه العملية باسم التربسين. يمكن عمل التربسين تحت شرطين مختلفين وهما التربسين الدافئ والتريبسين البارد. التربسين الدافئ هو طريقة معالجة الخلايا مع التربسين في ظروف دافئة عند درجة حرارة 36.5 - 370C. التربسين البارد هو عملية معالجة التربسين التي تتم في ظروف أكثر برودة ويفضل أن يكون ذلك في الجليد الذي يحافظ على درجات حرارة منخفضة للغاية.
ما هو التربسينية الدافئة؟
يمكن عمل التربسين لفصل المكونات الخلوية من أجل عزل الخلايا لإنتاج ثقافة خلوية أولية. التربسين هو إنزيم تحلل البروتين ، ويمكن أن يكون خليط الإنزيم المستخدم في التربسين إما مستخلصًا خامًا أو منتجًا منقى.يقال إن المستخلص الخام أكثر كفاءة في تحلل البروتين وتفكك الخلايا لأنه يحتوي على إنزيمات تحلل أخرى.
التربسين الدافئ هو الطريقة الأنزيمية الأكثر استخدامًا لتفصيل الخلايا التي تحدث في ظل ظروف درجات حرارة أعلى. قبل العلاج بالتريبسين ، يتم تقطيع الأنسجة المرغوبة إلى قطع أصغر. يسهل عملية التصنيف بسهولة. ثم يتم غسل الأنسجة المقطعة في وسط خاص يعرف بوسط الملح القاعدي التشريح.
عند الانتهاء من خطوة الغسل ، تتحول الخلايا إلى دورق يحتوي على الإنزيم النشط ، وهو التربسين. نظرًا لأن هذه التقنية تشير إلى بروتوكول التربسين الدافئ ، يتم وضع التربسين عند درجة حرارة حوالي 370C لمدة أربع ساعات تقريبًا.
الشكل 01: التربسين
يتم خلط المحتويات وتحريكها باستخدام طرق الطرد المركزي لسهولة البروتوكول وتسريع عملية التفصيل. بمجرد تحقيق الوقت الموصى به ، يمكن اشتقاق الخلايا من المادة الطافية. ثم يتم تحضين الخلايا المشتقة من المادة الطافية عند درجة حرارة ووقت معينين.
ما هو التريبسيني البارد؟
التربسين البارد هو النوع الآخر من التربسين الذي يحدث في الظروف الباردة. في هذه التقنية ، توضع الخلايا التي يتم تقطيعها وغسلها في قوارير على الجليد ثم نقعها في التربسين. فترة النقع أطول بكثير - حوالي 6-24 ساعة.
بعد الانتهاء من إجراء النقع ، تتم إزالة التربسين من محلول الخلية ، ويتم تحضين قطع الأنسجة بشكل أكبر عند 370C لمدة 20 - 30 دقيقة. يحدث تفكك الخلايا عن طريق الماصات المتكررة لمزيج الأنسجة.سيسمح هذا للخلايا بالانفصال عن الغشاء والوصول إلى المادة الطافية. بمجرد أن تصبح الخلايا في المادة الطافية ، يتم تحضينها وتنميتها في درجة الحرارة المطلوبة والفترة الزمنية.
طريقة التربسين الباردة لها مزايا عديدة
- إنتاجية أعلى من الخلايا القابلة للحياة حيث يتم تقليل تلف الخلية إلى الحد الأدنى. يتم تقليل تلف الخلية عن طريق عدم استخدام خطوات الطرد المركزي.
- طريقة مريحة للغاية.
- أقل مجهودا.
القيد الرئيسي لطريقة التربسين الباردة هو أنه لا يمكن استخدام كميات كبيرة في حالة واحدة.
ما هي أوجه التشابه بين التربسين الدافئ والبارد؟
- كل من عمليات التربسين الدافئة والباردة تستخدم إنزيم التربسين لتفصيل الخلايا.
- يتم استخدام كل من عمليات التربسين الدافئة والباردة في إجراءات زراعة الخلايا لتفكيك الخلايا.
- في كل من إجراءات العلاج بالتريبسين الدافئ والبارد ، يتم اشتقاق الخلايا من المادة الطافية.
ما هو الفرق بين التربسين الدافئ والبارد؟
التربسين الدافئ مقابل البارد |
|
| التربسين الدافئ هو طريقة معالجة الخلايا مع التربسين في ظروف دافئة عند درجة حرارة 36.5 - 370. | التربسين البارد هو عملية معالجة التربسين التي تتم في ظل ظروف أكثر برودة ويفضل أن يكون ذلك في الجليد الذي يحافظ على درجات حرارة منخفضة للغاية. |
| Protocol | |
| يتم الحفاظ على قطع الأنسجة المفرومة عند 370C بشكل مستمر طوال الإجراء. | يتم الاحتفاظ بقطع الأنسجة المفرومة مبدئيًا في درجات حرارة جليدية ثم الحفاظ عليها عند 370. |
| درجة الحرارة | |
| يحدث التربسين الدافئ في 36.5 - 370 | يحدث التربسين البارد في درجات حرارة الجليد البارد. |
| الوقت المستهلك | |
| مطلوب وقت أقل للعملية بأكملها (حوالي 4 ساعات) من التربسين الدافئ. | وقت أطول مطلوب (حوالي 6-24 ساعة) للتريبسين البارد. |
| حصيلة الخلايا القابلة للحياة | |
| منخفض في التربسين الدافئ | عالية في التربسين الباردة. |
| استخدام الطرد المركزي | |
| مطلوب الطرد المركزي لتفكيك الخلايا في التربسين الدافئ | الطرد المركزي غير مطلوب في التربسين البارد |
| كمية الأنسجة الأولية للتريبسين | |
| يمكن استخدام كمية أكبر من الأنسجة في عملية التربسين الدافئة | يمكن استخدام كمية صغيرة من الأنسجة في عملية التربسين الباردة. |
| تلف الخلية | |
| مرتفع بسبب الطرد المركزي في التربسين الدافئ. | أقل بسبب التربسين البارد. |
ملخص - التربسين الدافئ مقابل البارد
التربسين هو طريقة استخدام إنزيم التربسين المهين للبروتين لتفكيك وتحضير مزارع الخلايا الأولية أثناء عملية زراعة الخلايا. هناك طريقتان رئيسيتان للتريبسين على أساس درجات الحرارة المستخدمة أثناء الإجراء. هم التربسين الدافئة والباردة. يتم إجراء التربسين الدافئ عند 370C بينما يتم إجراء التربسين البارد تحت ظروف الجليد البارد.على الرغم من أن التربسين البارد يستغرق وقتًا أطول حتى يكتمل ، إلا أنه يقال إنه يحتوي على إنتاجية أعلى من الخلايا القابلة للحياة. ويرجع ذلك إلى حقيقة أن تلف الخلايا يتم تقليله إلى الحد الأدنى في عملية التربسين الباردة لأنها لا تستخدم خطوات طرد مركزي قوية. هذا هو الفرق بين التربسين الدافئ والبارد.
