الفرق الرئيسي - ELISA المباشر مقابل غير المباشر
المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم (ELISA) ، والمعروفة أيضًا باسم المقايسة المناعية الإنزيمية ، هي اختبار مصلي يكتشف الأجسام المضادة في الدم. يتم استخدامه كأداة تشخيص لمعرفة ما إذا كان المريض قد تعرض لنوع معين من الفيروسات أو عامل معدي آخر (مستضد) وما إذا كان الجسم قد أنتج أجسامًا مضادة للعدوى. يمكن لـ ELISA أيضًا تحديد الإصابات السابقة والحالية. ومن ثم ، غالبًا ما يتم استخدام ELISA كاختبار فحص مسبق من قبل الأطباء قبل التحليل المتعمق للأمراض. يمكن إجراء هذا الاختبار في المختبر عن طريق أخذ عينة دم من المريض.هناك نوعان من اختبار ELISA: ELISA المباشر و ELISA غير المباشر. الفرق الرئيسي بين ELISA المباشر وغير المباشر هو أن ELISA غير المباشر أكثر حساسية ويتطلب إضافة جسم مضاد ثانوي بينما ELISA المباشر أقل حساسية ويستخدم فقط الجسم المضاد الأولي.
ما هو Direct ELISA؟
ELISA هو اختبار تشخيصي للمرض يتم إجراؤه لتحديد وجود مستضدات أو أجسام مضادة معينة في الدم. يتم ذلك كمقايسة لوحة. يستخدم الأجسام المضادة المرتبطة بالإنزيمات التي يتم فحصها بسهولة. يرتبط وجود المستضدات في عينة المصل بأجسام مضادة محددة مرتبطة بالإنزيمات. في الخطوة الأخيرة ، تتم إضافة ركيزة معينة لتتفاعل مع الإنزيم. يحول الإنزيم الركيزة إلى منتج ملون أو منتج للإشارة. يكشف تغير اللون في الركيزة الكيميائية عن وجود جسم مضاد معين في عينة المصل. يستخدم اختبار ELISA المباشر فقط الجسم المضاد الأولي المرتبط بالإنزيم. عند الارتباط بالمستضد ، فإنه يغير اللون بسرعة ، مما يشير إلى وجود العامل المعدي في الدم.ومع ذلك ، فإن شدة الإشارات تكون أضعف في ELISA المباشر لأن الحواتم تقتصر على ارتباط المستضدات. وبالتالي ، فإن ELISA المباشر أقل حساسية مقارنة بـ ELISA غير المباشر.
الشكل 01: اختبار ELISA المباشر
ما هو ELISA غير المباشر؟
يمكن إجراء ELISA باستخدام نوعين من الأجسام المضادة وهما ؛ الجسم المضاد الأولي والجسم المضاد الثانوي. تستخدم أداة ELISA غير المباشرة كلا النوعين من الأجسام المضادة لتضخيم الإشارات من أجل اكتشاف أفضل. يتم تنفيذ تقنية ELISA غير المباشرة على النحو التالي.
- يتم تحضين اللوحات بالمستضدات وغسلها لمنع الارتباط غير المحدد.
- ثم يتم إضافة الأجسام المضادة الأولية وغسلها.
- يتم إضافة الجسم المضاد الثانوي المرتبط بالإنزيم وغسله.
- تمت إضافة الركيزة والسماح لها بالتفاعل مع الإنزيمات.
- يتم الكشف عن الإشارات ، ويتم تحديد وجود أو عدم وجود مستضد معين في العينة.
في اختبار ELISA غير المباشر ، يمكن للعديد من الأجسام المضادة الثانوية الارتباط بجسم مضاد أولي واحد. ترتبط الأجسام المضادة الثانوية بالإنزيمات التي يتم فحصها بسهولة. لذلك ، يمكن أن يُنتج ارتباط واحد إشارة قوية بسبب أكثر من تفاعل واحد. وبالتالي ، فإن ELISA غير المباشر أكثر حساسية من ELISA المباشر. ومع ذلك ، يمكن لـ ELISA غير المباشر عمل إشارات غير محددة بسبب التفاعلات المتصالبة للأجسام المضادة الثانوية.
الشكل 02: اختبار ELISA غير المباشر
ما هو الفرق بين ELISA المباشر وغير المباشر؟
مباشر مقابل ELISA |
|
| ELISA المباشر أقل حساسية مقارنة بـ ELISA غير المباشر. | ELISA غير المباشر أكثر حساسية. |
| الوقت المستغرق | |
| اختبار ELISA المباشر عملية سريعة. | ELISA غير المباشر مضيعة للوقت. |
| استخدام الأجسام المضادة | |
| يتم استخدام نوع واحد فقط من الأجسام المضادة (الأجسام المضادة الأولية) في ELISA المباشر. | يتم استخدام الأجسام المضادة الأولية والثانوية في ELISA غير المباشر. |
| رابط بالأنزيمات | |
| الأجسام المضادة الأولية مرتبطة بالإنزيمات. | الأجسام المضادة الثانوية مرتبطة بالإنزيمات. |
| تفاعلية متقاطعة للأجسام المضادة الثانية | |
| Direct ELISA يزيل التفاعل التبادلي للأجسام المضادة الثانية. | يتأثر ELISA غير المباشر بالتفاعل المتبادل للأجسام المضادة الثانية. |
| إشارات | |
| الإشارات ضعيفة مقارنة بـ ELISA غير المباشر. | يتم تضخيم الإشارات في ELISA غير المباشر. وبالتالي ، من السهل اكتشافها. |
ملخص - مباشر مقابل ELISA
ELISA هي تقنية كيميائية حيوية تستخدم بشكل أساسي في علم المناعة للكشف عن وجود جسم مضاد أو مستضد في عينة دم للمريض. يمكن إجراؤه عبر عمليتين تعرفان باسم ELISA المباشر أو غير المباشر. يستخدم اختبار ELISA المباشر الأجسام المضادة الأولية فقط لاكتشاف المستضد بينما يستخدم ELISA غير المباشر كلاً من الأجسام المضادة الأولية والثانوية.في ELISA المباشر ، يتم تمييز الأجسام المضادة الأولية بينما يتم تمييز الأجسام المضادة الثانوية ELISA غير المباشرة. هذا هو الفرق بين ELISA المباشر وغير المباشر.
