الفرق الرئيسي - YAC و M13 Phage Vector
يعد استنساخ الحمض النووي عملية مهمة تمكن من انتشار أجزاء مهمة من الحمض النووي للكائنات الحية. يتطلب ضم DNA محددًا مع ناقل الحمض النووي لإنشاء DNA المؤتلف الذي يتحول إلى الكائن الحي المضيف. الناقل هو جزيء DNA الذي يعمل كوسيلة لنقل مادة وراثية غريبة إلى خلية أو كائن حي آخر. يجب أن تكون قادرة على التكاثر داخل الكائن الحي المضيف وإنتاج نسخ متعددة من الحمض النووي المؤتلف. هناك أنواع مختلفة من النواقل المستخدمة في استنساخ الحمض النووي. كروموسوم الخميرة الاصطناعي (YAC) وناقل العاثية M13 نوعان بينهم.الفرق الرئيسي بين ناقل البكتيريا YAC و M13 هو أن YAC هو كروموسوم اصطناعي يتكاثر في خلايا الخميرة بينما ناقل العاثية M13 هو DNA دائري واحد مقطوع للعاثية M13 والذي يتكرر في خلايا E Coli.
ما هو ناقل YAC؟
YAC هو كروموسوم مصنوع صناعياً ولديه القدرة على حمل جزء كبير من الحمض النووي الغريب والتكاثر داخل خلايا الخميرة. إنه يحتوي على متواليات مركزية وتيلومير ومتكررة بشكل مستقل ضرورية للتكرار والاستقرار. يجب أن تحمل YAC أيضًا علامة انتقائية أو علامات ومواقع تقييد لجعلها ناقل استنساخ فعال. يمكن إدخال تسلسلات كبيرة تتراوح من 1000 كيلو بايت إلى 2000 كيلو بايت في YAC ونقلها إلى الخميرة.
الشكل 01: متجه YAC
ما هو M13 Phage Vector؟
Bacteriophage M13 هو فيروس يصيب ويتكاثر في إي كولاي. إن جينوم العاثية M13 صغير الحجم ، حوالي 6.7 كيلو بايت. وهو عبارة عن حمض نووي أحادي الجديلة ، دائري وإيجابي. يصيب هذا الفيروس على وجه التحديد بكتيريا E Coli من خلال F Pilus. بمجرد أن يدخل ssDNA في البكتيريا ، فإنه يصنع حبلا تكميليًا ويصبح dsDNA أو الشكل التكراري (RF) لـ M13. يمكن للترددات الراديوية أن تتصرف مثل البلازميد داخل الكائن الحي المضيف. يتكرر dsDNA داخل E Coli وينتج ssDNA تحمل لاقمات جديدة. يتم إطلاق هذه العاثيات الجديدة باستمرار من إي كولاي دون قتل الخلية المضيفة. ومع ذلك ، فإن العدوى تبطئ نمو بكتيريا القولونية. يمكن استخراج dsDNA من الخلايا البكتيرية واستخدامها كناقلات في استنساخ الحمض النووي. تُعرف باسم ناقلات العاثية M13. يمكن التلاعب بها بسهولة واستخدامها بشكل مشابه لناقلات البلازميد.
تعد القدرة الكامنة على إصابة هذه العاثيات M13 بمثابة مؤهل جيد لاستخدامها كناقل في استنساخ الجينات.عند تطوير M13 إلى ناقل ، يجب دمج العديد من العناصر في جينومها. هم ، جين لبروتين lac repressor (lac I) ، المنطقة القريبة من العامل لجين lac Z ، محفز lac وموقع استنساخ متعدد (polylinker). عندما يتم استخدام dsDNA الخاص بـ M13 كناقلات ، يمكن معاملته كناقل بلازميد. ومع ذلك ، فإن استخدام ssDNA M13 له مزايا في تسلسل الحمض النووي والطفرات الموجهة للموقع.
نظرًا لأن ناقل الملتهمة M13 يحمل مواقع استنساخ متعددة في منطقة lacZ ، يمكن التعرف بسهولة على النواقل المعاد تجميعها عن طريق فحص المستعمرة الزرقاء / البيضاء على لوحات أجار التي تحتوي على IPTG و X-Gal. لا تحتوي اللويحات الزرقاء المنتجة على الصفائح على العاثيات المعاد تجميعها. لذلك ، يمكن تحديد العاثيات ذات الإدخالات لغرض الاستنساخ.
الشكل 02: البكتيريا M13
ما هو الفرق بين YAC و M13 Phage Vector؟
YAC مقابل M13 Phage Vector |
|
| YAC هو كروموسوم معدّل وراثيًا ولديه القدرة على حمل جزء كبير من الحمض النووي الغريب والتكاثر داخل خلايا الخميرة. | M13 متجه العاثية هو ناقل فيروسي تم تطويره بواسطة البكتيريا M13 والتي تستخدم لإدخال الحمض النووي الأجنبي في E Coli. |
| الغرض | |
| تم تصميمYACs لاستنساخ أجزاء كبيرة من الحمض النووي الجيني إلى الخميرة. | M13 ناقلات العاثيات تستخدم لإدخال الحمض النووي الأجنبي في بكتيريا القولونية. |
| أدخل الطول | |
| يمكن أن تحتوي YACs على إدخالات جينومية بحجم قاعدة ميغا (1000 كيلو بايت - 2000 كيلو بايت). | حجم الإدخالات حوالي 1500 بت في الثانية. |
| البناء | |
| يصعب تنقية DNA YAC بشكل سليم وتتطلب تركيزًا عاليًا لتوليد نظام ناقل YAC. | يحدث عبر سلسلة إلكترون ضوئية دورية. |
| الاستقرار | |
| YAC غير مستقر. | يمكن استخراج عاثياتM13 بسهولة. |
| الحجم | |
| الإنزيمات جزيئات أكبر. | M13 العاثيات مستقرة من YAC. |
ملخص - YAC vs M13 Phage Vector
YAC هو نظام ناقل مصطنع يستخدم منطقة معينة من كروموسوم الخميرة لإدخال أجزاء كبيرة من المادة الوراثية في خلايا الخميرة.متجه العاثية M13 هو نظام ناقل مشتق من العاثية M 13 الذي يستخدم الإشريكية القولونية ككائن حي مضيف. هذا هو الفرق الرئيسي بين YAC و M13 Phage Vector. كلاهما مفيد بنفس القدر في تقنية الحمض النووي المؤتلف واستنساخ الجينات.
