الاختلاف الرئيسي بين البادئات العشوائية و oligo dT هو أن التمهيدي العشوائي عبارة عن مزيج من جميع متواليات oligonucleotide السداسية الممكنة ، بينما يتكون oligo dT التمهيدي من امتداد أحادي الجديلة من 12–18 deoxythymidines.
النسخ العكسي هي آلية يمكن من خلالها تصنيع cDNA باستخدام mRNA أو أي نوع من أنواع الحمض النووي الريبي. من أجل إنتاج (كدنا) ، ينبغي توفير إنزيم النسخ العكسي والمكونات الضرورية الأخرى ، وخاصة القالب والبادئات. الاشعال هي تسلسلات DNA القصيرة المصممة خصيصًا لتضخيم التسلسلات المستهدفة. البادئات العشوائية والبادئات oligo dT نوعان شائعان من البادئات المستخدمة في النسخ العكسي.لذلك ، فإن التمهيدي العشوائي أو التمهيدي oligo dT عبارة عن تسلسل قصير للنيوكليوتيد DNA مطلوب من أجل النسخ العكسي لبدء النسخ العكسي. اعتمادًا على قالب RNA ، يمكن تحديد التمهيدي المناسب من هذين النوعين من التمهيدي.
ما هي البرايمر العشوائية؟
التمهيدي العشوائي عبارة عن خليط من قليل النيوكليوتيدات يمثل جميع المتواليات السداسية الممكنة. التسلسل التمهيدي للطلاء التمهيدي العشوائي هو 5´ - d (NNNNN) –3´ N=G أو A أو T أو C. لذلك ، يمكن استخدام الاشعال العشوائي لتضخيم DNA أو RNA أحادي الجديلة بواسطة DNA polymerase أو النسخ العكسي ، على التوالى. إلى جانب ذلك ، فإن خليط التمهيدي العشوائي قادر على تضخيم جميع مناطق الحمض النووي الريبي لتوليد (كدنا). وبالتالي ، فإنه ينتج أطوال مختلفة من (كدنا).
الشكل 01: الاشعال العشوائي
الأهم من ذلك ، أن خليط البرايمر العشوائي لا يُظهر خصوصية القالب. إنه غير قادر على تمييز mRNA وأنواع الحمض النووي الريبي الأخرى. وتصلب مع أي نوع من أنواع الحمض النووي الريبي في العينة. ومع ذلك ، فإن خليط التمهيدي العشوائي مناسب للنسخ العكسي للـ RNAs بدون ذيول بولي (A) ، مثل rRNA ، و tRNA ، و RNAs غير المشفر ، و RNAs الصغيرة ، و mRNA بدائية النواة ، وما إلى ذلك ، و RNA المتدهورة ، و RNA مع الهياكل الثانوية المعروفة.
ما هو Oligo dT؟
التمهيدي Oligo dT هو امتداد 12-18 deoxythymine (dT). يمكن تمثيل تسلسل التمهيدي على أنه 5´-d (TTT TTT TTT TTT TTT TTT) -3. يتم استخدامه لإنتاج (كدنا) من mRNA التي تحتوي على ذيل بولي (A). في الأساس ، يعمل بمثابة مادة أولية للتفاعل المحفز بواسطة النسخ العكسي. أثناء النسخ العكسي ، يصلب oligo dT التمهيدي مع الذيل متعدد الأدينات الموجود في الطرف 3´ من معظم جزيئات mRNAs حقيقية النواة ويبدأ العملية.
الشكل 02: النسخ العكسي باستخدام Oligo dT Primer
على عكس التمهيدي العشوائي ، فإن oligo dT Primer ليس مناسبًا للحمض النووي الريبي المتدهور أو الحمض النووي الريبي الذي يفتقر إلى ذيول بولي (A) ، بما في ذلك الحمض النووي الريبي بدائية النواة و microRNA.
ما هي أوجه التشابه بين Random Primers و Oligo dT؟
- التمهيدي العشوائي و oligo dT primer نوعان من البادئات التي تستخدم في النسخ العكسي وصنع (كدنا).
- يزيد استخدام البرايمر العشوائي و oligo dT التمهيدي معًا من حساسية تخليق (كدنا).
- إنها متواليات نيوكليوتيدات قصيرة وحيدة الخيط.
ما هو الفرق بين البرايمر العشوائية و Oligo dT؟
التمهيدي العشوائي عبارة عن تسلسل قليل النوكليوتيد قصير يتكون من تسلسل عشوائي.وفي الوقت نفسه ، فإن oligo dT primer عبارة عن خيط قصير يتكون من 12 إلى 18 deoxythymidines. إذن ، هذا هو الفرق الرئيسي بين البادئات العشوائية و oligo dT. تسلسل التمهيدي العشوائي هو 5´ - d (NNNNNN) –3´ N=G أو A أو T أو C. في حين أن تسلسل oligo dT التمهيدي هو 5´-d (TTT TTT TTT TTT TTT TTT) -3´. لذلك ، يمكننا اعتبار هذا فرقًا آخر بين البادئات العشوائية و oligo dT.
علاوة على ذلك ، لا تُظهر البادئات العشوائية خصوصية القالب ، وتصلب مع أي نوع من أنواع الحمض النووي الريبي ، بينما تُظهر البادئات oligo dT خصوصية ذيول بولي (A) من mRNA حقيقية النواة.
الرسم البياني أدناه يلخص الفرق بين البادئات العشوائية و oligo dT.
ملخص - عشوائية Primers مقابل Oligo dT
التمهيدي العشوائي و oligo dT primer نوعان من البادئات المستخدمة في تخليق (كدنا).يتكون التمهيدي العشوائي من خليط من قليل النيوكليوتيدات ، يمثل جميع المتواليات السداسية المحتملة ، في حين أن oligo dT التمهيدي عبارة عن سلسلة أحادية الجديلة من 12 إلى 18 deoxythymidines. إذن ، هذا هو الفرق الرئيسي بين البادئات العشوائية و oligo dT. إلى جانب ذلك ، تعد أجهزة oligo dT الأولية مفيدة للنسخ العكسي كامل الطول للحمض النووي الريبي مع ذيل بولي (A) ، في حين أن الاشعال العشوائي مفيد للنسخ العكسي لمعظم أنواع الحمض النووي الريبي ، بما في ذلك الحمض النووي الريبي المتحلل ، والحمض النووي الريبي الذي يفتقر إلى ذيول بولي (A) والحمض النووي الريبي المحتوي على الهياكل الثانوية. لذلك ، لا يُظهر التمهيدي العشوائي خصوصية القالب بينما يُظهر التمهيدي oligo dT خصوصية تجاه mRNA حقيقية النواة التي تحتوي على ذيل بولي (A).
