الفرق الرئيسي بين اختبار BCA و Bradford هو أن اختبار BCA يستغرق وقتًا طويلاً وأقل دقة ، في حين أن اختبار Bradford سريع ودقيق.
اختبار BCA و Bradford هما طريقتان للمقايسة لتحديد تركيز البروتين. هذان الاختباران لهما مبادئ مختلفة للمقايسة والاختلافات في دقتها.
ما هو BCA Assay؟
مقايسة BCA أو فحص حمض البيسينشونينيك هو اختبار كيميائي حيوي مفيد في تحديد التركيز الكلي للبروتين في محلول. سميت هذه الطريقة أيضًا بمقايسة سميث نسبةً لمخترعها ، بول ك. سميث. تُظهر هذه الطريقة التحليلية أوجه تشابه مع مقايسة بروتين Lowry أو اختبار بروتين برادفورد أو كاشف بيوريت.يمكننا ملاحظة تركيز البروتين الكلي في عينة معينة من خلال تغيير لون محلول العينة ، والذي ينتقل من اللون الأخضر إلى اللون الأرجواني. يحدث هذا التغيير اللوني بما يتناسب مع محتوى البروتين. بعد ذلك يمكننا استخدام تقنية قياس الألوان لتحليل كثافة اللون ومحتوى البروتين في العينة.
طريقة BCA لتقدير البروتين
عند النظر في آلية اختبار BCA ، يحتوي محلول BCA النموذجي على محلول قلوي للغاية مع درجة حموضة تقارب 11.25 ، وتشمل المكونات في هذا المحلول حمض البيسينشونينيك ، وكربونات الصوديوم ، وبيكربونات الصوديوم ، وطرطرات الصوديوم ، و كبريتات النحاس (II) بينتاهيدراتي. يعتمد هذا الاختبار بشكل أساسي على تفاعلين كيميائيين: اختزال النحاس (II) إلى النحاس (I) بواسطة روابط الببتيد في البروتين واستخلاب جزيئين من حمض البيسينشونينيك مع أيون النحاس (I) ، مما ينتج عنه مركب أرجواني اللون يمكنه تمتص الضوء عند الطول الموجي 562 نانومتر. في التفاعل الأول ، تتناسب كمية النحاس (II) المختزلة بواسطة روابط الببتيد مع كمية البروتين في العينة.
ما هو برادفورد الفحص؟
مقايسة برادفورد هي طريقة تحليلية طيفية مفيدة في قياس تركيز البروتين في المحلول. تم تطوير هذه الطريقة من قبل ماريون إم برادفورد في عام 1976 ، وهي طريقة سريعة ودقيقة نسبيًا.
تفاعل اللون للبروتين وكاشف برادفورد
يمكننا استخدام هذه الطريقة لتحديد تركيز كمية البروتين في العينة. التفاعل الكيميائي الذي يحدث في العينة أثناء هذا الاختبار يعتمد فقط على تكوين الأحماض الأمينية للبروتين في العينة.
طريقة برادفورد لتقدير البروتين
عند النظر في طريقة هذا الاختبار ، فهو عبارة عن اختبار قياس لون البروتين يعتمد على تحول الامتصاص للصبغة المسمى Coomassie Brilliant Blue G-250. بشكل عام ، توجد هذه الصبغة في ثلاثة أشكال كشكل أنيوني (أزرق) وشكل محايد (أخضر) وشكل كاتيوني (أحمر). لذلك ، في ظل الظروف الحمضية ، تغير الصبغة لونها من الأحمر إلى الأزرق. هذا بسبب ارتباط البروتين بالصباغ. في المقابل ، إذا لم يكن هناك بروتين لربط الصبغة ، فلن يظهر تغير اللون ، ويتحول لون المحلول إلى أحمر-بني. هذه الصبغة قادرة على تكوين مركب قوي غير تساهمي مع مجموعة الكربوكسيل للبروتين من خلال قوى فان دير وال والجاذبية الكهروستاتيكية.
ما هو الفرق بين BCA و Bradford Assay؟
اختبار BCA و Bradford هما طريقتان للمقايسة لتحديد تركيز البروتين. هذان الاختباران لهما مبادئ مختلفة للمقايسة والاختلافات في دقتها. يتمثل الاختلاف الرئيسي بين اختبار BCA و Bradford في أن اختبار BCA يستغرق وقتًا طويلاً وأقل دقة ، في حين أن اختبار Bradford سريع ودقيق.
يلخص الرسم البياني التالي الاختلافات بين BCA و Bradford في شكل جدول.
ملخص - BCA vs Bradford Assay
مقايسة BCA أو فحص حمض البيسينشونينيك هو اختبار كيميائي حيوي مفيد في تحديد التركيز الكلي للبروتين في محلول. مقايسة برادفورد هي طريقة تحليلية طيفية مفيدة في قياس تركيز البروتين في المحلول. الفرق الرئيسي بين BCA و Bradford هو أن BCA يستغرق وقتًا طويلاً وأقل دقة ، في حين أن اختبار Bradford سريع ودقيق.
