الفرق الرئيسي - SYBR Green vs Taqman
SYBR Green و Taqman هما طريقتان مستخدمتان لاكتشاف أو مشاهدة عملية تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي. SYBR Green هي طريقة تعتمد على إقحام صبغة تلطيخ الحمض النووي بينما Taqman هي طريقة تعتمد على مسبار التحلل المائي. تم تصميم كلتا التقنيتين لتوليد الفلورة أثناء PCR ، مما يسمح لآلة PCR في الوقت الحقيقي بمراقبة التفاعل في "الوقت الفعلي". يتم تنفيذ طريقة SYBR Green باستخدام صبغة فلورية تسمى SYBR green وتكتشف التضخيم عن طريق ربط الصبغة لإنتاج DNA مزدوج تقطعت بهم السبل. يتم تنفيذ Taqman باستخدام مجسات مزدوجة العلامات ويكشف التضخيم عن طريق تدهور المسبار بواسطة Taq polymerase وإطلاقات الفلوروفور.هذا هو الفرق الرئيسي بين SYBR Green و Taqman.
ما هو SYBR Green؟
SYBR Green هي صبغة فلورية تستخدم لتلطيخ الأحماض النووية ، وخاصة الحمض النووي المزدوج الذي تقطعت به السبل في علم الأحياء الجزيئي. تُستخدم طريقة SYBR Green لتقدير منتجات PCR أثناء تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي. بمجرد ارتباطه بالحمض النووي ، يمتص مركب صبغ الحمض النووي الناتج الضوء الأزرق ويصدر ضوءًا أخضر كثيفًا. يحدث ذلك بسبب التغيير الهيكلي الذي يحدث في جزيء الصبغة عند الارتباط بالحمض النووي المزدوج الشريطة. عندما ينتج PCR المزيد والمزيد من الحمض النووي ، يرتبط المزيد من جزيئات الصبغة بالحمض النووي ، مما ينتج عنه مزيد من التألق. لذلك ، يزداد التألق مع تراكم منتج PCR. وبالتالي ، يمكن قياس كمية منتج PCR كميًا عن طريق الكشف عن مضان SYBR الأخضر.
يمكن أيضًا استخدام الصبغة الخضراءSYBR لتوسيم الحمض النووي في القياس الخلوي والفحص المجهري الفلوري. تم استبدال بروميد الإيثيديوم بنجاح بـ SYBR Green نظرًا لأن Ethidium Bromide هو صبغة مسرطنة مع مشاكل التخلص أثناء تصور الحمض النووي في الرحلان الكهربائي للهلام.
هناك مزايا وعيوب طريقة SYBR الخضراء. هذه الطريقة حساسة للغاية وغير مكلفة وسهلة الاستخدام. ومع ذلك ، نظرًا لقدرته على الارتباط بأي DNA مزدوج الشريطة ، يمكن أن يؤدي الارتباط غير المحدد إلى الإفراط في التقدير الكمي لمنتج PCR.
الشكل 01: تقنية SYBR الخضراء
ما هو تقمان؟
Taqman هي طريقة بديلة لـ SYBR Green لمراقبة عملية PCR في الوقت الحقيقي. تعتمد هذه الطريقة على نشاط نوكلياز خارجي 5 '- 3' من إنزيم Taq polymerase لتحطيم المجسات أثناء تمديد الخيط الجديد وإطلاق حامل الفلور. تُستخدم المجسات ذات العلامات المزدوجة في هذه الطريقة وتستند إلى التحلل المائي للمسبارات. يتم تمييز المجسات الفلورية بأوليغنوكليوتيدات الحمض النووي التي تحتوي على جزيء مراسل الفلورسنت (حامل الفلورسنت) في نهاية 5 وجزيء تقطير في نهاية 3.وهي مصممة للارتباط بالقالب المفرد الذي تقطعت به السبل على الجانب الآخر من الصلب التمهيدي. يضيف Taq polymerase النيوكليوتيدات إلى التمهيدي ويمد الخيط الجديد نحو المجسات ذات العلامات المزدوجة. بمجرد أن يلتقي Taq polymerase بالمسبار ، ينشط عمل نوكلياز خارجي لبوليميراز Taq ويحلل المسبار. بمجرد الانتهاء من تخليق الخيط الجديد ، يتعرض المسبار لتدهور كامل وإطلاق حامض الفلور. الافراج عن الفلوروفور يولد مضان. يعمل جزيء الفلورسنت Quencher على إخماد الضوء المنبعث بكفاءة ويخلق ناتجًا لتقدير منتج PCR. إن إطلاق الفلوروفورات وكمية نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل متناسبان. وبالتالي ، يمكن بسهولة إجراء القياس الكمي بطريقة Taqman.
الشكل 02: طريقة Taqman
يتم استخدام طريقة Taqman في الوقت الحقيقي PCR ، والقياس الكمي للتعبير الجيني ، والكشف عن الأشكال الوراثية ، والتقدير الكمي لحذف الحمض النووي الصبغي ، وتحديد البكتيريا ، والتحقق من تحليل المصفوفات الدقيقة ، والتنميط الجيني SNP إلخ.
ما الفرق بين SYBR Green و Taqman؟
SYBR Green مقابل Taqman |
|
| SYBR Green يعتمد على صبغة ربط الحمض النووي. | Taqman يعتمد على مجسات التهجين ونشاط نوكلياز خارجي من 5 إلى 3 "Taq polymerase. |
| مجسات الفلورسنت المسمى | |
| لا توجد مجسات ذات علامات الفلورسنت غير مطلوبة. | تحقيقات مزدوجة التسمية مطلوبة. |
| التحليل الجيني المتعدد | |
| لا يمكن استخدامه لأهداف الجينات المتعددة. | يمكن استخدامه لأهداف الجينات المتعددة. |
| التكلفة | |
| هذا أقل تكلفة | هذا أغلى |
| خصوصية | |
| هذا أقل تحديدًا ويرتبط بأي حمض نووي مزدوج | هذه محددة للغاية لأن المجسات تكتشف منتجات التضخيم المحددة. |
| الفعالية | |
| هذا أقل فعالية. | هذا فعال للغاية. |
| التطبيق | |
| يستخدم هذا في الوقت الحقيقي PCR ، تصور هلام الاغاروز ، وسم الحمض النووي وما إلى ذلك. | يستخدم هذا في الوقت الحقيقي PCR ، والتقدير الكمي للتعبير الجيني ، واكتشاف الأشكال الجينية المتعددة ، وما إلى ذلك. |
ملخص - SYBR Green و Taqman
Taqman و SYBR green طريقتان مستخدمتان في PCR في الوقت الفعلي (PCR الكمي). تتيح كلتا الطريقتين تحديد كمية منتج PCR بكفاءة وتعتمد على انبعاث الفلورة. تستخدم طريقة Taqman مجسات مزدوجة العلامات للكشف عن الحمض النووي المتراكم بينما تستخدم طريقة SYBR Green صبغة الفلورسنت. كلتا الطريقتين لها تطبيقات مختلفة في البيولوجيا الجزيئية.
