الفرق الرئيسي - نيك الترجمة مقابل التمديد التمهيدي
ترجمة نيك والتمديد التمهيدي هما تقنيتان مهمتان يتم إجراؤهما في علم الأحياء الجزيئي. يتمثل الاختلاف الرئيسي بين ترجمة Nick وامتداد التمهيدي في أن عملية ترجمة Nick تنتج تحقيقات معنونة لتقنيات التهجين الأخرى بينما تحدد طريقة تمديد التمهيدي تسلسل RNA معين من خليط وتكشف معلومات حول تعبير mRNA. كلتا الطريقتين لهما أهمية كبيرة ويتم إجراؤهما بشكل روتيني في مختبرات الأبحاث الجزيئية.
ما هي ترجمة نيك؟
ترجمة Nick هي تقنية مهمة تستخدم لإعداد تحقيقات ذات علامات لمختلف التقنيات البيولوجية الجزيئية مثل النشاف والتهجين في الموقع والتهجين الفلوري في الموقع وما إلى ذلك.إنها طريقة في المختبر لتوسيم الحمض النووي. تُستخدم مجسات الحمض النووي لتحديد تسلسل معين من الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي. بمساعدة مسبار يحمل علامة ، يمكن تمييز أجزاء معينة أو تصورها من خليط معقد من الحمض النووي. لذلك ، يتم تحضير المجسات ذات العلامات باستخدام تقنيات مختلفة لاستخدامها في تقنيات مختلفة. ترجمة Nick هي إحدى هذه الطرق التي تنتج مجسات ذات علامات بمساعدة إنزيمات DNase 1 و DNA polymerase 1.
تبدأ عملية ترجمة نيك بنشاط إنزيم DNase 1. يقدم DNase 1 شقوقًا في العمود الفقري للفوسفات للحمض النووي المزدوج الذي تقطعت به السبل عن طريق شق روابط الفوسفوديستر بين النيوكليوتيدات. بمجرد إنشاء النك ، سيتم إنتاج مجموعة 3 'OH المجانية من النيوكليوتيد وسيعمل إنزيم DNA polymerase 1 على ذلك. يعمل نشاط نوكلياز خارجي من 5 إلى 3 بوصات لبوليميراز الحمض النووي 1 على إزالة النيوكليوتيدات من النك باتجاه اتجاه 3 بوصات لشريط الحمض النووي. في نفس الوقت ، يعمل نشاط البلمرة لأنزيم DNA polymerase 1 ويضيف النيوكليوتيدات لتحل محل النيوكليوتيدات المزالة.إذا تم تمييز النيوكليوتيدات ، فسيحدث الاستبدال بواسطة النيوكليوتيدات المسمى وسيحدد الحمض النووي للتعرف عليه. يمكن استخدام هذا الحمض النووي المُصنَّع حديثًا كمجسات في تفاعلات تهجين مختلفة في البيولوجيا الجزيئية.
الشكل 01: عملية ترجمة Nick
ما هو ملحق التمهيدي؟
التمديد التمهيدي هو تقنية تستخدم للعثور على تسلسل معين من الحمض النووي الريبي من خليط الحمض النووي الريبي وتحديد موقع 5 'نهاية نسخة مرنا. كما أنها تستخدم لدراسة بنية الحمض النووي الريبي والتعبير. يتم تنفيذ طريقة التمديد التمهيدي باستخدام الاشعال المسمى أو النيوكليوتيدات المسمى. إذا تم استخدام البادئات المسمى ، فإنه يستبعد الحاجة إلى وضع العلامات على النيوكليوتيدات التي تستخدم لتخليق (كدنا).هناك عدة خطوات في هذه التقنية. يبدأ باستخراج الحمض النووي الريبي من العينة. ثم يضاف التمهيدي قليل النوكليوتيد المسمى إلى الخليط مع المكونات الضرورية لتوليف (كدنا) لتسلسل الحمض النووي الريبي المحدد. يحمى التمهيدي بالتسلسل التكميلي من الخليط. باستخدام التسلسل الملدن التمهيدي كقالب ، يقوم إنزيم النسخ العكسي بتوليف الحمض النووي التكميلي (cDNA) لتسلسل الحمض النووي الريبي. يحدث التلدين الأولي والنسخ العكسي فقط عندما يكون تسلسل الحمض النووي الريبي المحدد موجودًا في العينة. أخيرًا ، عند إجراء تغيير طبيعة الرحلان الكهربائي للهلام ، يمكن تحديد حجم تسلسل الحمض النووي الريبي. من السهل أيضًا العثور على قاعدة +1 لتسلسل mRNA (موقع بدء النسخ) بواسطة طريقة التمديد التمهيدي. يمكن تحديد كمية mRNA الموجودة في العينة بهذه الطريقة إذا تم استخدام التمهيدي الزائد.
الشكل 02: تمديد التمهيدي
ما هو الفرق بين Nick Translation و Primer Extension؟
ترجمة نيك مقابل التمديد التمهيدي |
|
| ترجمة Nick هي عملية تنشئ تحقيقات DNA معنونة لتفاعلات التهجين المختلفة. | التمديد التمهيدي هو تقنية تستخدم للعثور على RNA معين أو لدراسة التعبير الجيني. |
| الانزيمات المستخدمة | |
| يتم استخدام إنزيماتDNase 1 و DNA بوليميراز. | يتم استخدام إنزيم النسخ العكسي. |
| الأهمية | |
| ترجمة نيك تسهل تعليم تسلسل الحمض النووي المحدد. | يتيح امتداد التمهيدي الكشف عن حجم تسلسل mRNA المحدد والمقدار الموجود في العينة. |
ملخص - Nick Translation vs Primer Extension
ترجمة Nick هي طريقة مستخدمة لتجميع المجسات ذات العلامات بناءً على أنشطة إنزيمات DNase 1 و E coli DNA polymerase 1. إنها طريقة في المختبر مستخدمة في المختبرات قبل تقنيات التهجين المختلفة. أثناء ترجمة النيك ، يزيل نشاط نوكلياز 5'-3 'لبوليميراز الحمض النووي 1 النيوكليوتيدات قبل نشاط النيكل والبوليميراز لبوليميراز الحمض النووي 1 ويحل محل النيوكليوتيدات التي تمت إزالتها بالنيوكليوتيدات المسمى خلف النك. التمديد التمهيدي هو طريقة تستخدم لاكتشاف نسخة معينة من الحمض النووي الريبي من خليط وتحديد حجم وكمية RNA الفائدة. هذا هو الفرق بين نيك الترجمة والتمديد التمهيدي.
