الاختلاف الرئيسي بين ترجمة النيك وملء النهاية هو أن ترجمة النيك هي عملية تخلق تحقيقات الحمض النووي المعنونة لتفاعلات التهجين المختلفة بينما ملء النهاية هو تقنية تخلق شظايا غير حادة عن طريق إضافة نيوكليوتيدات إلى نتوءات مفردة.
ترجمة نيك وملء النهاية هما تقنيتان مستخدمتان في البيولوجيا الجزيئية. تُستخدم ترجمة Nick في وضع العلامات على مجسات التهجين من أجل اكتشاف تسلسلات نوكليوتيد محددة. يتم استخدام حشوة النهاية لعمل شظايا غير حادة ذات نهايات لزجة مع بروزات مفردة الجديلة. كلتا الطريقتين لهما أهمية كبيرة ، ويتم إجراؤهما بشكل روتيني في مختبرات الأبحاث الجزيئية.
ما هي ترجمة نيك؟
ترجمة Nick هي تقنية مهمة تستخدم لإعداد تحقيقات ذات علامات للعديد من التقنيات البيولوجية الجزيئية مثل النشاف ، والتهجين في الموقع ، والتهجين الفلوري في الموقع ، وما إلى ذلك ، وهي طريقة في المختبر لتوسيم الحمض النووي. تُستخدم مجسات الحمض النووي لتحديد تسلسل معين من الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي. بمساعدة مسبار يحمل علامة ، يمكن تمييز أجزاء معينة أو تصورها من خليط معقد من الحمض النووي. لذلك يتم تحضير المجسات المسمى باستخدام تقنيات مختلفة. ترجمة Nick هي إحدى هذه الطرق التي تنتج مجسات ذات علامات بمساعدة إنزيمات DNase 1 و DNA polymerase 1.
الشكل 01: ترجمة نيك
تبدأ عملية ترجمة Nick بنشاط إنزيم DNase 1.يقدم DNase 1 شقوقًا إلى العمود الفقري للفوسفات للحمض النووي المزدوج الشريطة عن طريق شق روابط الفوسفوديستر بين النيوكليوتيدات. بمجرد إنشاء النك ، سيتم إنتاج مجموعة 3 OH من النيوكليوتيد ، وسيعمل إنزيم DNA polymerase 1 على ذلك. 5 ′ إلى 3 نشاط نوكلياز خارجي لبوليميراز DNA 1 يزيل النيوكليوتيدات من النك باتجاه اتجاه 3 ′ من حبلا DNA.
في نفس الوقت ، يعمل نشاط إنزيم بوليميراز 1 DNA ويضيف النيوكليوتيدات لتحل محل النيوكليوتيدات التي تمت إزالتها. إذا تم تمييز النيوكليوتيدات ، فسيحدث الاستبدال بواسطة النيوكليوتيدات المسمى ، وسيقوم بتمييز الحمض النووي للتعرف عليه. أخيرًا ، يمكن استخدام هذا الحمض النووي المسمى حديثًا كمجسات في تفاعلات التهجين المختلفة.
ما هو الملء النهائي؟
حشوة النهاية هي تقنية مستخدمة في البيولوجيا الجزيئية لعمل شظايا غير حادة. ينتج عن الهضم القيد شظايا ذات بروزات. قد لا تكون هذه الأجزاء متوافقة للربط في نواقل البلازميد.غالبًا ما يتم إضعاف النواقل للسماح بربط الأطراف غير المتوافقة. لذلك ، يمكن تخفيف الأجزاء ذات الأجزاء المتدلية عن طريق إضافة النيوكليوتيدات إلى الشريط التكميلي باستخدام الجزء المتدلي كقالب للبلمرة. تُعرف هذه العملية باسم ملء النهاية.
بوليميراز DNA مثل جزء Klenow من DNA Polymerase I و T4 DNA Polymerase تحفز الحشوة النهائية. يضيفون النيوكليوتيدات لملء (5 → 3 ′) ومضغها (3 ′ → 5 ′). بمجرد ملء الأطراف اللاصقة ، تصبح غير حادة ، وتكون جاهزة للربط في متجه.
علاوة على ذلك ، يمكن استخدام حشوة النهاية لتسمية جزيئات الحمض النووي. ومع ذلك ، يمكن استخدامه فقط لتسمية جزيئات الحمض النووي ذات الأطراف اللاصقة. بالمقارنة مع ترجمة النك ، فإن حشوة النهاية هي طريقة ألطف ونادرًا ما تتسبب في حدوث كسر في الحمض النووي.
ما هي أوجه التشابه بين Nick Translation و End Filling؟
- كل من ترجمة نيك وملء النهاية هي تقنيات بيولوجية جزيئية.
- يمكن استخدامها لتسمية المجسات.
- كلاهما في المختبر
ما الفرق بين ترجمة Nick و End Filling؟
ترجمة Nick هي تقنية تنشئ مجسات معنونة للتهجين. على النقيض من ذلك ، فإن حشوة النهاية هي تقنية تخلق شظايا حادة للربط في نواقل. لذلك ، هذا هو الفرق الرئيسي بين ترجمة نيك وملء النهاية. علاوة على ذلك ، تتطلب ترجمة Nick استخدام نشاط نوكلياز خارجي من 5'إلى 3 بينما لا يتطلب ملء النهاية نشاط نوكلياز خارجي من 5'إلى 3.
مخطط المعلومات البياني أدناه يقوم بجدولة الاختلافات بين ترجمة نيك وملء النهاية بمزيد من التفصيل.
ملخص - ترجمة Nick vs End Filling
ترجمة نيك هي طريقة تدمج النيوكليوتيدات ذات العلامات الإشعاعية في الحمض النووي. يقوم بتجميع المجسات ذات العلامات بناءً على أنشطة إنزيمات DNase 1 و E. coli DNA polymerase 1. من ناحية أخرى ، فإن حشوة النهاية هي تقنية تنتج شظايا غير حادة. عندما يكون للأجزاء نهايات لزجة (متدلية مفردة الجديل) ، فمن الضروري جعلها نهايات غير حادة من أجل ربطها في نواقل. يضيف الحشو النهائي نيوكليوتيدات متوافقة ويخلق شظايا غير حادة الأطراف لجعلها متوافقة للربط. وهكذا ، هذا يلخص الفرق بين ترجمة النيك وملء النهاية.
