الفرق الرئيسي - صفحة SDS مقابل الصفحة الأصلية
SDS والصفحة الأصلية نوعان من تقنيات الرحلان الكهربائي للهلام متعدد الأكريلاميد المستخدمة في البيولوجيا الجزيئية. الفرق الرئيسي بين صفحة SDS والصفحة الأصلية هو نوع هلام بولي أكريلاميد المستخدم. في صفحة SDS ، يتم استخدام مادة هلامية مبطلة للطبيعة ، وبالتالي يتم فصل الجزيئات بناءً على وزنها الجزيئي. في المقابل ، في الصفحة الأصلية ، يتم استخدام المواد الهلامية التي لا تغير طبيعة الصفات. لذلك ، يتم فصل الجزيئات بناءً على حجمها وشحنتها وشكلها.
يستخدم هلام البولي أكريلاميد الكهربائي (صفحة) هلام مصنوع عن طريق بلمرة مونومرات الأكريلاميد مع بيساكريلاميد الميثيلين.بولي أكريلاميد أقوى وأكثر استقرارًا من الاغاروز. تحتوي المواد الهلامية بولي أكريلاميد على مسام أصغر حجمًا يتيح الفصل الفعال للبروتينات. هناك نوعان رئيسيان من إعدادات الصفحة وهما صفحة SDS والصفحة الأصلية. SDS Page أو Sodium-Dodecyl Sodium-Dodecyl Sulfate Polyacrylamide الكهربائي للهلام يفصل البروتينات بناءً على أوزانها الجزيئية. تستخدم المواد الهلامية في تغيير طبيعة المواد الهلامية في صفحة SDS. تستخدم Native Page مواد هلامية غير مفسدة للطبيعة وتفصل البروتينات بناءً على حجمها وشحنها وشكلها (التشكل ثلاثي الأبعاد).
ما هي صفحة SDS؟
صفحة SDS هي التقنية الأكثر شيوعًا المستخدمة لفصل البروتينات بناءً على وزنها الجزيئي. يتكون الجل عن طريق إضافة SDS (كبريتات دوديسيل الصوديوم) ، وهو منظف. أطقم الأسنان SDS البروتينات في مونومرات. SDS هو منظف أنيوني. لذلك ، فإنه يضيف شحنة سالبة صافية إلى البروتينات ضمن نطاق واسع من الأس الهيدروجيني. عندما يتم نقل الشحنة السالبة الصافية على جزيئات البروتين ، بسبب اختلاف الشحنة ، يتم تكسير الهياكل المعقدة.بسبب الشحنة السالبة ، تنجذب البروتينات نحو النهاية الإيجابية. وبالتالي ، فإن الجزيئات ذات الوزن الجزيئي المنخفض تنتقل بشكل أسرع على مصفوفة الهلام ويمكن ملاحظتها بالقرب من الأنود ، بينما يتم ملاحظة البروتينات ذات الوزن الجزيئي الأعلى بالقرب من الآبار.
الشكل 01: صفحة SDS
ارتباط SDS بسلسلة البولي ببتيد يتناسب مع كتلته الجزيئية النسبية. لذلك ، يمكن أيضًا تحديد الكتلة الجزيئية عبر صفحة SDS. يتم تلطيخ المواد الهلامية SDS Page عن طريق تلطيخ البروموفينول الأزرق. تتنوع تطبيقات صفحات SDS إلى حد أكبر حيث يمكن استخدامها لتقدير الكتلة الجزيئية النسبية ولتحديد الوفرة النسبية للبروتينات في خليط البروتين. يمكن أيضًا استخدام صفحة SDS لتحديد توزيع البروتين في خليط من البروتينات.يتم أيضًا تطبيق صفحة SDS لتنقية وتقييم البروتينات. يتم استخدامه كإجراء أولي للنشاف والتهجين الغربي ، والذي يستخدم بدوره لرسم خرائط البروتين وتحديده.
ما هي الصفحة الأصلية؟
يستخدم الرحلان الكهربي للهلام البولي أكريلاميد الأصلي (الصفحة الأصلية) مادة هلامية غير متغيرة الطبيعة. لذلك ، لا يتم إضافة SDS أو أي عامل تغيير طبيعة آخر إلى مصفوفة الهلام. في Native Page ، يعتمد فصل البروتينات على شحنة البروتين وحجمه. لذلك فإن حركة البروتين تعتمد على شحنة وحجم البروتين.
تعتمد شحنة البروتين على السلاسل الجانبية للأحماض الأمينية. إذا كانت السلاسل الجانبية مشحونة سلبًا ، فسيحصل البروتين على شحنة سالبة شاملة والعكس صحيح. تحتفظ البروتينات بتشكيل ثلاثي الأبعاد بسبب الطي الذي يحدث. ينتج الطي عن أنواع الروابط المتعددة في البروتينات مثل روابط ثاني كبريتيد والتفاعلات الكارهة للماء والروابط الهيدروجينية.لذلك ، إذا تم نقل الصفحة الأصلية عند درجة حموضة محايدة ، فسيتم فصل البروتينات وفقًا للشكل الجزيئي للبروتين. لذلك ، يمكن استخدام Native Page كتقنية حساسة للكشف عن التغيير في شحنة أو شكل البروتين.
الميزة الرئيسية للصفحة الأصلية هي أن البروتين المستخدم في تحليل الصفحة يمكن استعادته في حالته الأصلية بعد تحليل الصفحة ، حيث لا يتم إزعاج البروتين أثناء العملية. الصفحة الأصلية هي تقنية إنتاجية عالية نسبيًا ، ويزداد استقرار البروتين.
الشكل 02: الصفحة الأصلية
عند الانتهاء من تشغيل الجل ، يمكن رؤية هلام Native Page عن طريق التلوين باستخدام أزرق البروموفينول أو أي كاشف تلطيخ مناسب آخر. تتضمن تطبيقات الصفحة الأصلية فصل البروتينات الحمضية بما في ذلك البروتينات السكرية مثل إريثروبويتين المؤتلف البشري أو تحديد البروتينات الموجودة في مصل الأبقار الزلال (BSA).
ما هي أوجه التشابه بين صفحة SDS والصفحة الأصلية؟
- كلا نظامي صفحة SDS والصفحة الأصلية يستخدمان جل بولي أكريلاميد كمصفوفة للهلام.
- كلاهما يستخدم لفصل وتحديد البروتينات.
- كلاهما يستخدم التنقل الكهربي لفصل المركبات.
- كلاهما يمكن القيام به بطريقة رأسية أو بطريقة أفقية (يتم في الغالب كإعدادات صفحة عمودية لأن طول التشغيل أكبر).
- جهاز الرحلان الكهربائي بما في ذلك خزان الهلام ، الأمشاط ، مصدر الطاقة مطلوب لتشغيل كلتا التقنيتين.
- يمكن عمل تصور الجل عن طريق تلطيخ الطرق في كلتا التقنيتين.
ما الفرق بين صفحة SDS والصفحة الأصلية؟
صفحة SDS مقابل الصفحة الأصلية |
|
| صفحة SDS أو صفحة كبريتات الصوديوم دوديسيل تفصل البروتينات على أساس وزنها الجزيئي ، وتستخدم هلام تغيير طبيعة. | الصفحة الأصلية تستخدم المواد الهلامية التي لا تغير طبيعة البروتينات وتفصل البروتينات بناءً على حجمها وشحنها وشكلها (التشكل ثلاثي الأبعاد). |
| نوع الجل | |
| يتم استخدام هلام تغيير طبيعة في صفحة SDS. | يتم استخدام هلام غير مفسد للطبيعة في الصفحة الأصلية. |
| وجود SDS | |
| SDS موجود كمنظف لنقل شحنة سالبة على العينة في صفحة SDS. | SDS غير موجود في الصفحة الأصلية. |
| أساس الفصل | |
| يعتمد فصل البروتينات على الوزن الجزيئي للبروتين في صفحة SDS. | يعتمد الفصل على حجم وشكل جزيء البروتين في الصفحة الأصلية. |
| استقرار البروتين | |
| استقرار البروتين منخفض في صفحة SDS | استقرار البروتين مرتفع في الصفحة الأصلية |
| استعادة البروتين الأصلي | |
| غير ممكن لأنه تم تغيير طبيعته في صفحة SDS. | ممكن على الصفحة الأصلية |
ملخص - صفحة SDS مقابل الصفحة الأصلية
صفحة SDS والصفحة الأصلية نوعان من تقنيات الفصل الكهربائي للهلام بولي أكريلاميد المستخدمة لفصل البروتينات. يتم معالجة صفحة SDS بمنظف يسمى SDS. يضفي SDS شحنة سالبة شاملة على البروتين ، مما يؤدي بعد ذلك إلى تمسخ البروتين.لذلك ، يتم فصل البروتينات بناءً على وزنها الجزيئي. في المقابل ، لا تستخدم تقنية الصفحة الأصلية أي عامل تغيير طبيعة. وبالتالي يتم فصل البروتينات بناءً على حجمها أو شكلها. هذا هو الفرق بين صفحة SDS والصفحة الأصلية.
