الفرق الرئيسي - صفحة SDS مقابل لطخة ويسترن
النشاف الغربي هو تقنية تكشف عن بروتين معين من عينة بروتين. يتم تنفيذ هذه التقنية عبر عدة خطوات رئيسية: الرحلان الكهربائي للهلام ، النشاف ، والتهجين. الرحلان الكهربائي للهلام دوديسيل كبريتات الصوديوم بولي أكريلاميد (SDS Page) هو نوع من تقنية الرحلان الكهربائي الهلامي الذي يستخدم لفصل البروتينات وفقًا لأحجامها (الأوزان الجزيئية). اللطخة الغربية هي ورقة خاصة من غشاء النشاف الذي يستخدم لنقل نفس نمط البروتينات في صفحة SDS. يتمثل الاختلاف الرئيسي بين صفحة SDS واللطخة الغربية في أن صفحة SDS تسمح بفصل البروتينات في خليط بينما تسمح البقعة الغربية باكتشاف وتقدير بروتين معين من خليط.كلاهما مفيد في دراسات تحليل البروتين.
ما هي صفحة SDS؟
صفحة SDS هي تقنية رحلان هلامي تستخدم لفصل البروتين. يستخدم بشكل شائع في الكيمياء الحيوية وعلم الوراثة والطب الشرعي والبيولوجيا الجزيئية. بمجرد استخراج البروتينات من العينة ، يتم تشغيلها على هلام مكون من SDS و polyacrylamide. SDS هو منظف أنيوني يستخدم في جعل البروتينات خطية (تفسد طبيعة البروتينات) ولإضفاء شحنة سالبة على البروتينات الخطية بما يتناسب مع كتلتها الجزيئية. يصبح بولي أكريلاميد دعامة صلبة للجيل. تهاجر البروتينات المشوهة سالبة الشحنة نحو النهاية الإيجابية للجهاز من خلال الهلام. وفقًا لأحجام البروتينات ، تختلف سرعات الهجرة بين البروتينات ويحدث الانفصال. لذلك ، فإن صفحة SDS مفيدة لفصل البروتينات الفردية بناءً على أحجامها.
يعد تحضير هلام بولي أكريلاميد لتجزئة البروتينات خطوة حاسمة في صفحة SDS.يؤثر التركيز الصحيح لبولي أكريلاميد ونوع عامل الربط المتقاطع المستخدم بشدة على الخصائص الفيزيائية للجيل ، مما يجعل الفصل الفعلي للبروتينات المختلفة. يجب إدارة أحجام مسام الجل بشكل صحيح من أجل الفصل الفعال. ومع ذلك ، تعتبر صفحة SDS تقنية عالية الدقة لفصل البروتين.
تقنية صفحة SDS لها قيود رئيسية في تحليل البروتين. نظرًا لأن SDS يفسد البروتينات قبل الفصل ، فإنه لا يسمح باكتشاف النشاط الأنزيمي ، وتفاعلات ربط البروتين ، والعوامل المساعدة للبروتين ، وما إلى ذلك.
الشكل 01: صفحة SDS
ما هو ويسترن بلوت؟
تقنية النشاف الغربي تمكن من الكشف عن بروتين معين من خليط البروتين وقياس الكمية والوزن الجزيئي للبروتين.اللطخة الغربية هي الغشاء المستخدم أثناء إجراء النشاف للحصول على صورة معكوسة لأنماط البروتين في هلام SDS- بولي أكريلاميد. يتكون الغشاء المستخدم في النشاف الغربي في الغالب من النيتروسليلوز أو ثنائي فلوريد البولي فينيلدين (PVDF). يمكن استخدام الغشاء الذي يحتوي على البروتين المنقول لتحديد البروتين المطلوب. يتطلب أجسامًا مضادة عالية الجودة لاكتشاف البروتين المطلوب عن طريق التهجين. يرتبط الجسم المضاد بمستضده المحدد ويكشف عن وجود المستضد المطلوب وهو بروتين.
يتم إجراء نقل البروتينات من هلام بولي أكريلاميد SDS إلى اللطخة الغربية عن طريق التجلط الكهربائي. إنها طريقة فعالة وسريعة تجعل البروتينات تفرز بالكهرباء من الهلام وتنتقل إلى غشاء النيتروسليلوز (لطخة غربية).
الشكل 02: لطخة ويسترن
ما الفرق بين صفحة SDS و Western Blot؟
صفحة SDS مقابل ويسترن بلوت |
|
| صفحة SDS هي تقنية هلام الكهربائي. | لطخة غربية هي تقنية يتم إجراؤها على غشاء للكشف عن بروتين معين من خليط. |
| استخدم | |
| تسمح صفحة SDS بفصل البروتينات وفقًا لأحجامها. | لطخة غربية تسمح بنقل البروتينات على هلام صفحة SDS دون تغيير نمطها وتسمح بالتهجين بأجسام مضادة محددة. |
| عيوب | |
| تمسخ البروتين ، والتكلفة العالية ، ووجود المواد الكيميائية السامة العصبية هي عيوب هذه التقنية. | هذه التقنية مستهلكة للوقت وتتطلب ظروف شخصية جيدة ومحددة من ذوي الخبرة. |
ملخص - صفحة SDS مقابل Western Blot
صفحة SDS واللطخة الغربية طريقتان تشاركان في تحليل البروتين. تسمح صفحة SDS بفصل البروتينات بسهولة على مادة هلامية وفقًا لوزنها الجزيئي. تساعد البقعة الغربية على تأكيد وجود وكمية بروتين معين من خلال التهجين بأجسام مضادة محددة. هذا هو الفرق بين صفحة SDS واللطخة الغربية.
