الفرق الرئيسي - النيتروسليلوز مقابل PVDF
النشاف الغربي هو طريقة تسمح باكتشاف وتقدير بروتينات معينة من عينة بروتينية. تعتمد موثوقية التقنية على اختيار الغشاء المناسب لامتصاص البروتينات من الجل. هناك أنواع مختلفة من الأغشية التي يسهل اختراقها. أغشية النيتروسليلوز و PVDF هما غشاءان مفضلان من قبل الباحثين بسبب خصائصهما الخاصة على الأنواع الأخرى من الأغشية. يعد الاختيار بين النيتروسليلوز أو PVDF أيضًا تحديًا آخر في النشاف الغربي. يتمتع كل من النيتروسليلوز و PVDF بقدرة عالية على امتصاص البروتين.يتمثل الاختلاف الرئيسي بين غشاء النيتروسليلوز وغشاء PVDF في أن أغشية النيتروسليلوز لا تملك القدرة على تجريد الأجسام المضادة وإعادة استخدام الغشاء لإعادة تشكيل الأجسام المضادة بينما تتمتع أغشية PVDF بقدرة على التجريد وإعادة الاستخدام.
ما هو النيتروسليلوز؟
Nitrocellulose عبارة عن بوليمر يتم تصنيعه عن طريق معالجة السليلوز بحمض النيتريك ويستخدم لصنع أغشية دقيقة المسام في البيولوجيا الجزيئية ، خاصة لتقنيات النشاف مثل النشاف الجنوبي والشمالي والغربي. تتراوح أحجام مسام أغشية النيتروسليلوز من 3 إلى 20 ميكرومتر. تسهل أغشية النيتروسليلوز الصغيرة التي يسهل اختراقها الكشف عن التفاعل الكيميائي المناعي الذي يحدث على سطح الغشاء. لذلك ، غالبًا ما تستخدم أغشية النيتروسليلوز لتثبيت البروتينات والكشف عن بروتينات معينة في النشاف الغربي. يمكن لأغشية النيتروسليلوز أيضًا شل حركة البروتينات السكرية والأحماض النووية.
تُفضل أغشية النيتروسليلوز في فحوصات التدفق الجانبي بسبب العديد من الميزات.تمتص أغشية النيتروسليلوز البروتينات بتركيز عالٍ. المذيب المستخدم لترطيب الغشاء لا يقلل من امتصاص بروتين غشاء النيتروسليلوز. يمكن قطع أغشية النيتروسليلوز بسهولة إلى حجم الهلام المطلوب ونقل البروتينات من الجل إلى الغشاء عن طريق النقل الكهربائي أو الشعري. يسمح النيتروسليلوز بتدفق أسرع للبروتينات عبر الغشاء بإمكانية ربط عالية. يُظهر النيتروسليلوز قوة محسّنة في المعالجة. سمة خاصة أخرى لغشاء النيتروسليلوز هي أنه يمكن لصقها بسهولة باستخدام مواد لاصقة مقاومة للماء غير مذيبة على دعامات بلاستيكية مختلفة.
الشكل 01: غشاء النيتروسليلوز للنشاف الغربي
ما هو PVDF؟
ثنائي فلوريد البوليفينيل (PVDF) عبارة عن بوليمر فلورو ينتج عن بلمرة ثنائي فلوريد فينيلدين ولديه قدرة عالية على تثبيت البروتينات.لذلك ، يتم استخدام الأغشية الصغيرة التي يسهل اختراقها المصنوعة من PVDF في تقنيات النشاف الغربية لتحليل بروتينات معينة من مخاليط البروتينات. يمكن أيضًا استخدام أغشية PVDF لتحليل الأحماض الأمينية وتسلسل البروتين. أهم ما يميز غشاء PVDF فوق غشاء النيتروسليلوز هو أنه يمكن تجريده بسهولة من الأجسام المضادة وإعادة استخدامه لتحقيقات الأجسام المضادة اللاحقة.
أغشية PVDF أكثر سمكًا من أغشية النيتروسليلوز ؛ وبالتالي ، أكثر مقاومة للأضرار أثناء إعادة الاستخدام. أغشية PVDF شديدة الكراهية للماء. لذلك ، يجب نقعها في الميثانول أو الأيزوبروبانول قبل الاستخدام.
ما هو الفرق بين النيتروسليلوز و PVDF؟
النيتروسليلوز مقابل PVDF |
|
| النيتروسليلوز بوليمر مكون من السليلوز. | PVDF عبارة عن بوليمر فلورو ينتج عن بلمرة فينيلدين ديفلورايد. |
| حجم مسام الغشاء | |
| أحجام المسام النموذجية هي 0.1 أو 0.2 أو 0.45 ميكرومتر | أحجام المسام النموذجية هي 0.1 أو 0.2 أو 0.45 ميكرومتر |
| سعة ربط البروتين | |
| النيتروسليلوز لديه قدرة ربط البروتين من 80 إلى 100 ميكروغرام / سم2. | PVDF لديه قدرة ربط بروتين من 170 إلى 200 ميكروغرام / سم2. |
| حساسية | |
| هذا لديه حساسية منخفضة مقارنة بـ PVDF. | هذا لديه حساسية عالية |
| الكشف عن البروتينات منخفضة التعبير | |
| نظرًا لأن الحساسية منخفضة في أغشية النيتروسليلوز ، فهي غير مناسبة للكشف عن البروتينات التي يتم التعبير عنها بشكل منخفض. | هذا أكثر ملاءمة للكشف عن البروتينات منخفضة التعبير بسبب حساسيتها العالية. |
| ضوضاء الخلفية | |
| هذا لديه ضوضاء خلفية أقل | هذا به ضوضاء أعلى في الخلفية. |
| التفاعلات مع البروتينات | |
| ترتبط جزيئات البروتين بأغشية النيتروسليلوز من خلال التفاعلات الكارهة للماء. | ترتبط البروتينات بأغشية PVDF من خلال التفاعلات الكارهة للماء وثنائي القطب. |
| طبيعة الغشاء | |
| النيتروسليلوز هش وهش. ومع ذلك ، تتوفر إصدارات من النيتروسليلوز ، وهي مقاومة. | PVDF أكثر متانة ومقاومة كيميائية أعلى. |
| القدرة على التجريد وإعادة الاستخدام | |
| قد يواجه النيتروسليلوز صعوبة في التجريد والنسخ دون فقد الإشارة. | PVDF مثالي لنسخ التطبيقات وتسلسلها. |
| الملاءمة | |
| النيتروسليلوز مثالي للكشف عن البروتينات منخفضة الوزن الجزيئي. | PVDF أكثر ملاءمة للكشف عن البروتينات ذات الوزن الجزيئي العالي. |
| استخدامات أخرى | |
| يمكن استخدام النيتروسليلوز لتحليل الحمض النووي ونشاف النقطة / الفتحة. | يمكن استخدامPVDF لتسلسل البروتين وأنظمة فحص الطور الصلب. |
| التكلفة | |
| هذا أرخص من أغشية PVDF. | هذا أغلى من أغشية النيتروسليلوز. |
| الحاجة للترطيب المسبق | |
| لا تتطلب أغشية النيتروسليلوز النقع المسبق بالميثانول | تتطلب أغشية PVDF النقع المسبق بالميثانول. |
ملخص - النيتروسليلوز مقابل PVDF
كانت أغشية النيتروسليلوز هي الأغشية الأولى المستخدمة تجاريًا لمقايسة التدفق الجانبي. لديهم قدرة عالية على امتصاص البروتينات. لذلك ، يتم استخدام أغشية النيتروسليلوز في النشاف الغربي. PVDF هو نوع آخر من الأغشية المستخدمة في النشاف الغربي وله أيضًا قدرة عالية على امتصاص البروتين. يستخدم كلا النوعين في النشاف الغربي لتحليل البروتين. ومع ذلك ، فإن أغشية PVDF لها سمات خاصة أكثر ، مما يجعلها أكثر ملاءمة من أغشية النيتروسليلوز للنشاف الغربي. لكن أغشية النيتروسليلوز أكثر ملاءمة للكشف عن البروتينات منخفضة الوزن الجزيئي ، وأغشية PVDF أكثر ملاءمة للكشف عن البروتينات ذات الوزن الجزيئي العالي.هذا هو الفرق بين أغشية النيتروسليلوز و PVDF.
