الفرق الرئيسي - التمهيدي الأمامي مقابل التمهيدي العكسي
تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) هو طريقة تضخيم الحمض النووي المستخدمة في التطبيقات البيولوجية الجزيئية. إنها تقنية شائعة الاستخدام تصنع ملايين إلى مليارات النسخ من تسلسل الحمض النووي المهتم بشكل خاص. إنها طريقة في المختبر يتم إجراؤها في المختبرات. تعتمد تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) كليًا على بوليميراز الحمض النووي المنتج تجاريًا والذي يسمى Taq polymerase. ويتطلب أيضًا العديد من المكونات الأخرى وصيانة مناسبة لدرجة الحرارة. أحد المكونات المهمة هو البرايمر. الاشعال هي تسلسلات DNA القصيرة المصممة خصيصًا لتسلسل الحمض النووي المستهدف.عادة ما يكون طولها حوالي 20 نيوكليوتيد. يحفز بوليميراز Taq إضافة النيوكليوتيدات في تسلسل النوكليوتيدات الموجود مسبقًا. ومن ثم ، يتم تقديم البادئات كنقاط انطلاق لتركيب خيوط جديدة. يعمل Taq polymerase فقط في اتجاه 5 "إلى 3" ومن ثم يحدث تخليق الحمض النووي في نفس اتجاه 5 "إلى 3". نظرًا لأن الحمض النووي مزدوج الشريطة ، فهناك حاجة إلى نوعين من البادئات في تفاعل البوليميراز المتسلسل. وهي معروفة باسم التمهيدي الأمامي والعكس التمهيدي. يُطلق على البادئات الأمامية والعكسية استنادًا إلى اتجاه استطالة التمهيدي في الحمض النووي عند حدوث تخليق الحمض النووي. يحفز التمهيدي الأمامي مع خيط DNA المضاد للدلالة ويبدأ في تركيب + خمسة خيوط من الجين في اتجاه 5 "إلى 3". يحمى التمهيدي العكسي مع خيط الإحساس ويبدأ في تركيب الخيط التكميلي لخيط الترميز ؛ وهو - بحيث يكون خيط الجين في اتجاه 5'إلى 3 '. هذا هو الفرق الرئيسي بين التمهيدي الأمامي والعكسي.
ما هو Forward Primer؟
الاتجاه الأمامي هو توليف خيط الترميز أو خيط الإحساس للجين. يحفز بوليميراز Taq تخليق حبلا جديد في اتجاه 5 "إلى 3". يحدث توليف خيط الترميز عندما يتدهور التمهيدي مع الخيط غير المشفر أو المضاد للتعبير ويستطيل في اتجاه 5 "إلى 3".
الشكل 01: البادئات الأمامية والعكسية
يُعرف التمهيدي الذي يصلب مع الخيط المضاد للترميز أو الخيط غير المشفر أو خيط القالب باسم التمهيدي الأمامي نظرًا لأن التمهيدي الأمامي يعمل كنقطة انطلاق لتركيب الترميز أو الخيط الإيجابي للجين. يحتوي التمهيدي الأمامي على تسلسل نيوكليوتيد قصير مكمل للنهاية المرفقة بـ 3 بوصات من الشريط المضاد. يتم تهجينه مع الخيط المضاد للاندماج ويسهل بوليميريز Taq لإضافة نيوكليوتيدات مكملة لقالب القالب.
ما هو عكس التمهيدي؟
التمهيدي العكسي هو تسلسل الحمض النووي القصير الذي يصلب بنهاية 3 من خيط الإحساس أو حبلا الترميز. يعمل التمهيدي العكسي كنقطة انطلاق لتجميع خيط تكميلي لتسلسل الترميز أو التسلسل غير المشفر. تم تصميم التمهيدي العكسي مكملًا للطرف 3 من خيط الترميز. ومن ثم ، فإنه يصلب مع نهاية 3 'المرفقة من حبلا الترميز ويسمح لـ Taq polymerase بتركيب الخيط المضاد أو حبلا القالب. نظرًا لأن اتجاهه يكون بطريقة معكوسة ، فإن هذا التمهيدي يسمى التمهيدي العكسي.
كل من البادئات العكسية والأمامية مهمة لإنتاج ملايين إلى مليارات النسخ من مناطق معينة من الحمض النووي المستهدفة أو المهتمة.
ما هي أوجه التشابه بين التمهيدي الأمامي والعكسي؟
- كل من البادئات الأمامية والعكسية مصنوعة من قليلات النوكليوتيدات.
- يمتلك كل من البادئات الأمامية والعكسية تسلسل نيوكليوتيد قصير مكمل للنهايات المرافقة لخيوط الحمض النووي المزدوجة.
- تتكون كل من البادئات الأمامية والعكسية من 20 نيوكليوتيدات.
- يتم استخدام كل من البادئات الأمامية والعكسية في تفاعلات البلمرة المتسلسلة.
- يتم تصنيع كل من البادئات الأمامية والعكسية تجارياً.
- كلا من البادئات الأمامية والعكسية مستقرة في درجة الحرارة ولديها عادة Tm مماثلة.
- كلا التمهيديين الأمامي والخلفي صلبان مع تسلسل الحمض النووي المستهدف.
- تم تصميم كل من البادئات الأمامية والعكسية وفقًا لتفاعلات تفاعل البوليميراز المتسلسل.
- يتم تقديم كل من البادئات الأمامية والعكسية كنقاط انطلاق لتضخيم الحمض النووي.
- كل من الاشعال العكسي والأمامي مهمان لإنتاج ملايين نسخة من مناطق معينة من تسلسلات الحمض النووي المستهدفة أو المهتمة.
ما هو الفرق بين التمهيدي الأمامي والعكسي؟
Forward Primer مقابل Reverse Primer |
|
| التمهيدي الأمامي هو تسلسل الحمض النووي القصير الذي يتهجين مع الطرف 3 من عدم الترميز أو حبلا القالب للجين ويعمل كنقطة انطلاق لتركيب تسلسل الترميز. | التمهيدي العكسي هو تسلسل الحمض النووي القصير الذي يتهجين مع الطرف الثالث من الترميز أو الخيط غير المصقول ويعمل كنقطة انطلاق لتركيب التسلسل غير المشفر. |
| صلب ستراند | |
| التمهيدي إلى الأمام يصلب مع حبلا القالب. | التمهيدي العكسي يصلب مع حبلا غير مقولب. |
| نتيجة تسلسل جديد | |
| التمهيدي الأمامي يسهل تركيب تسلسل الترميز. | التمهيدي العكسي يسهل توليف التسلسل غير المشفر. |
ملخص - Forward vs Reverse Primer
هناك نوعان من البادئات المتضمنة في تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل. هم بادئات أمامية وعكسية. استنادًا إلى استطالة التمهيدي في تخليق خيوط الحمض النووي الجديدة ، يتم تمييز هذه البادئات أو تسميتها. يقوم بوليميراز Taq بتوليف الحمض النووي الجديد في اتجاه 5 "إلى 3". ومن ثم ، تم تصميم البرايمر كمكمل لثلاث نهايات من الخيوط المزدوجة. التمهيدي الأمامي الذي يمتد في اتجاه 5 "إلى 3" يتم تهجينه مع الطرف 3 من المضاد أو القالب أو التسلسل غير المشفر. إنه بمثابة نقطة البداية لتجميع تسلسل الترميز. التمهيدي العكسي الذي يمتد في اتجاه 5 'إلى 3' يتهجين مع نهاية 3 'من الترميز أو nontemplate أو حبلا الإحساس.إنه بمثابة نقطة البداية لتجميع التسلسل غير المشفر. هذا هو الفرق بين التمهيدي الأمامي والعكسي.
