الفرق الرئيسي FPLC و HPLC هو أن FPLC هو نوع من الكروماتوغرافيا السائلة التي تنقي الجزيئات الحيوية الكبيرة مثل البروتينات والنيوكليوتيدات والببتيدات ، بينما HPLC هو نوع من الكروماتوغرافيا السائلة التي تفصل المركبات ذات الوزن الجزيئي الصغير.
اللوني السائل هو تقنية تستخدم لفصل العينة إلى مكوناتها الفردية. يحدث هذا الفصل بسبب تفاعل عينات محددة مع مراحل متحركة وثابتة. يتم فصل المكونات داخل العينة بناءً على ألفة كل مكون للمرحلة المتنقلة في الكروماتوغرافيا السائلة. عندما تمر المرحلة المتنقلة والعينة عبر عمود ، تبدأ مكونات العينة في الانفصال إلى نطاقات يمكن اكتشافها بواسطة التحليل الطيفي للأشعة المرئية وفوق البنفسجية.لذلك ، FPLC و HPLC نوعان من تقنيات الكروماتوغرافيا السائلة.
ما هو FPLC؟
FPLC هو نوع من اللوني السائل الذي ينقي الجزيئات الحيوية الكبيرة مثل البروتينات والنيوكليوتيدات والببتيدات. تم تطوير كروماتوجرافيا البروتين السريع السائل (FPLC) وتسويقها لأول مرة في السويد من قبل شركة فارماسيا في عام 1982. وغالبًا ما تستخدم لتحليل أو تنقية خلائط البروتين. يحدث هذا على أساس مبدأ تقارب مكونات العينة لتحريك السوائل (الطور المتحرك) والمواد الصلبة المسامية (الطور الثابت). في FPLC ، تكون المرحلة المتنقلة عبارة عن مخزن مؤقت ، والطور الثابت عبارة عن راتنج يتكون من خرز. يتكون عادة من agarose متصالب معبأ في زجاج أسطواني أو عمود بلاستيكي.
الشكل 01: جهاز FLPC (كروماتوغرافيا سائل البروتين السريع)
في معظم إستراتيجية FLPC ، يتم استخدام راتنج التبادل الأيوني. لذلك ، فإن بروتين الفائدة سوف يرتبط بالراتنج عن طريق تفاعل الشحنة. تستخدم تقنية FLPC أيضًا مخازن مؤقتة: المخزن المؤقت 1 (المخزن المؤقت قيد التشغيل) والمخزن المؤقت 2 (المخزن المؤقت شطف). في البداية ، عند تشغيل المخزن المؤقت ومزيج العينة عبر العمود ، فإن البروتين المطلوب في الخليط سيرتبط بالراتنج عن طريق تفاعل الشحنة. لكن البروتين محل الاهتمام ينفصل ويعود إلى المحلول في المخزن المؤقت للشطف عندما يمر المخزن المؤقت للشطف من خلال العمود في نهاية العملية. في وقت لاحق ، يمر المحلول (الذي يحتوي على بروتين مهم) عبر كاشفين يقيسان تركيز الملح وتركيز البروتين. عند استخلاص كل بروتين ، يظهر على أنه "ذروة" أثناء الاكتشاف ويمكن جمعه لمزيد من الاستخدام.
ما هو HPLC؟
HPLC هو نوع من الكروماتوغرافيا السائلة التي تفصل المركبات ذات الوزن الجزيئي الصغير. في عام 1969 ، تم تصنيع أول HPLC تجاريًا بواسطة Waters Corporation ، الولايات المتحدة الأمريكية.في الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC) ، يتم ضخ خليط عينة (مادة تحليلية) في مذيب (طور متحرك) عبر عمود به مادة تعبئة كروماتوغرافية (طور ثابت) عند ضغط مرتفع. يُحمل خليط العينة بواسطة تيار غاز ناقل متحرك من الهيليوم أو النيتروجين.
الشكل 02: HPLC (كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء)
المكونات في خليط العينة التي لها أقل قدر من التفاعل مع المرحلة الثابتة أو أكبر قدر من التفاعل مع الطور المتحرك ستخرج من العمود بشكل أسرع. من ناحية أخرى ، فإن المكونات الموجودة في خليط العينة التي لها أكبر قدر من التفاعل مع المرحلة الثابتة أو أقل قدر من التفاعل مع الطور المتحرك ستخرج من العمود بشكل أبطأ. بناءً على مبدأ التفاعل أعلاه ، يمكن فصل مكونات خليط العينة.علاوة على ذلك ، يحدد كاشف الجهاز كل مكون من مكونات خليط العينة الذي يخرج من العمود. يستخدم HPLC لفحص العينات البيئية والبيولوجية لوجود أو عدم وجود مركبات معروفة ، مثل الأدوية أو السموم أو مبيدات الآفات. يتم استخدامه في صناعات مختلفة مثل الأدوية والبيئية والطب الشرعي والمواد الكيميائية.
ما هي أوجه التشابه بين FPLC و HPLC؟
- FPLC و HPLC من أنواع الكروماتوغرافيا السائلة.
- كلاهما يستخدم لفصل وتحديد العينات البيولوجية.
- لديهم طور متحرك سائل ومرحلة ثابتة صلبة.
- كلا الأسلوبين يستخدمان عمودًا لتمرير العينة.
- تستخدم هذه التقنيات المضخات وأجهزة الكشف والصمامات والبرامج لفصل العينات والكشف عنها.
ما هو الفرق بين FPLC و HPLC؟
FPLC هو نوع من الكروماتوغرافيا السائلة التي تستخدم لتنقية الجزيئات الحيوية الكبيرة مثل البروتينات والنيوكليوتيدات والببتيدات. HPLC هو نوع من الكروماتوغرافيا السائلة التي تستخدم لفصل المركبات ذات الوزن الجزيئي الصغير. لذلك ، هذا هو الفرق الرئيسي بين FPLC و HPLC. علاوة على ذلك ، يستخدم FPLC أجهزة مراقبة الأس الهيدروجيني والموصلية وكذلك مجمعات الكسور. في المقابل ، لا يستخدم HPLC أجهزة مراقبة الأس الهيدروجيني والموصلية ومجمعات الكسور.
يسرد الرسم البياني أدناه المزيد من الاختلافات بين FPLC و HPLC في شكل جدول.
ملخص - FPLC مقابل HPLC
الكروماتوغرافيا هي تقنية تحليلية معملية تستخدم لفصل المكونات عن الخليط. وهي مقسمة إلى عدة أنواع مثل كروماتوغرافيا العمود ، كروماتوغرافيا الغاز ، كروماتوغرافيا السائل ، كروماتوغرافيا التبادل الأيوني ، إلخ. FPLC و HPLC نوعان من تقنيات الكروماتوغرافيا السائلة. FPLC هو نوع من الكروماتوغرافيا السائلة التي تستخدم لتنقية الجزيئات الحيوية الكبيرة مثل البروتينات والنيوكليوتيدات والببتيدات. من ناحية أخرى ، HPLC هو نوع من الكروماتوغرافيا السائلة التي تستخدم لفصل المركبات ذات الوزن الجزيئي الصغير.وبالتالي ، هذا هو ملخص ما هو الفرق بين FPLC و HPLC.
