الفرق الرئيسي بين Coomassie وتلطيخ الفضة هو أن تلطيخ coomassie هو تقنية تلطيخ بالبروتين تستخدم صبغة زرقاء لامعة من coomassie ، بينما تلطيخ الشظية هو تقنية تلطيخ البروتين التي تستخدم صبغة فضية.
يعد فصل البروتين وتحديده خطوات حاسمة في تحليل البروتينات. يحتاجون إلى توصيف بروتين عالي الدقة بعد الرحلان الكهربائي للهلام. هناك العديد من تقنيات التلوين التي تشمل البقع المختلفة مثل الأصباغ الأنيونية (الأزرق اللامع كوماسي) ، الكاتيونات المعدنية (إيميدازول - الزنك) ، صبغة الفضة والأصباغ الفلورية ، إلخ. في بعض الأحيان ، يمكن أيضًا استخدام المجسات المشعة.يعتمد اختيار تقنية التلوين على البساطة وتوافر معدات التصوير في المختبر وما إلى ذلك.
ما هو تلوين كوماسي؟
تلطيخ كوماسي هو أسلوب لتلوين البروتين يستخدم صبغة زرقاء لامعة كوماسي. يطلق عليه بشكل عام تقنية كوماسي الزرقاء. كوماسي الأزرق اللامع هو صبغة البروتين الأنيونية الأكثر شعبية. عادةً ما تلطخ هذه البقعة جميع البروتينات تقريبًا بخطي كمي جيد عند حساسية متوسطة. تلصق صبغة كوماسي الزرقاء اللامعة بشكل غير خاص بجميع البروتينات تقريبًا. هناك نوعان مختلفان من البقع الزرقاء الرائعة من coomassie: R-250 و G-250. يوفر R-250 أوقات تلطيخ أقصر ، بينما يتوفر G-250 بتركيبات أكثر حساسية وصديقة للبيئة.
الشكل 01: تلطيخ كوماسي
أصباغ Coomassie تحظى بشعبية كبيرة في دراسات قياس الطيف الكتلي ودراسات تحديد البروتين. علاوة على ذلك ، بقعة coomassie الآمنة بيولوجيًا هي تركيبة غير خطرة من coomassie blue G-250 المتوفرة حاليًا في السوق. ميزة هذه التركيبة هي أنها لا تتطلب سوى الماء للشطف والتخلص من الماء. توفر صبغة كوماسي الآمنة بيولوجيًا حساسية مكافئة لطبقة كوماسي الزرقاء التقليدية G-250 ولكنها أفضل من صبغة كوماسي R-250. علاوة على ذلك ، فإنه يحتوي على بروتوكول تلطيخ أبسط وأسرع من بروتوكول Coomassie الأزرق التقليدي G-250. عيب تلطيخ كوماسي الأزرق هو أنه أقل حساسية مقارنة بتلطيخ الفضة. تلطيخ كوماسي الأزرق أقل حساسية بحوالي 50 ضعفًا من تلطيخ الفضة. ومع ذلك ، نظرًا لبساطته في الارتباط ، فهو مفضل في العديد من الدراسات.
ما هو طلاء الفضة؟
تلطيخ الفضة هو أسلوب لتلوين البروتين يستخدم صبغة الفضة.يستخدم تلطيخ الفضة لتلطيخ كل من المواد الهلامية من مادة الاغاروز والبولي أكريلاميد. تم تطوير تلطيخ الفضة للبروتين في هلام الاغاروز لأول مرة في عام 1973 بواسطة Kerenyi و Gallyas. في وقت لاحق ، تم تكييفه للبروتينات في المواد الهلامية بولي أكريلاميد التي تستخدم في SDS-PAGE. حاليًا ، يستخدم تلوين الفضة أيضًا لتلوين الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي. من أجل تلطيخ المواد الهلامية ، يتم تحضين المواد الهلامية بمحلول نترات الفضة في هذه الطريقة. بقع الفضة هي المواقع التي تتواجد فيها البروتينات من البني إلى الأسود.
الشكل 02: تلوين الفضة
تعتمد شدة تلطيخ الفضة على البنية الأساسية للبروتين. علاوة على ذلك ، يمكن أن تؤثر أيضًا نظافة الأوعية المستخدمة ونقاء الكواشف على جودة تلطيخ الفضة.ومع ذلك ، فإن عيب تلطيخ الفضة هو أنه غير قادر على اكتشاف جميع البروتينات ، وخاصة البروتينات السكرية والبروتينات ذات المجموعات الكبيرة المعدلة المرتبطة بسلاسلها الجانبية.
ما هي أوجه التشابه بين Coomassie وتلوين الفضة؟
- Coomassie وتلطيخ الفضة طريقتان تستخدمان في تلطيخ البروتين.
- يمكنهم تلطيخ كل من البروتينات والحمض النووي.
- كلا تقنيات التلوين لها عيوب
- هذه التقنيات لها خطوات متشابهة ، مثل الإصلاح والتلطيخ والتلوين.
ما هو الفرق بين Coomassie وتلوين الفضة؟
تلطيخ كوماسي هو أسلوب لتلوين البروتين يستخدم صبغة زرقاء لامعة ، في حين أن تلطيخ الشظية هو تقنية تلطيخ بالبروتين تستخدم صبغة الفضة. وبالتالي ، هذا هو الفرق الرئيسي بين Coomassie وتلطيخ الفضة. علاوة على ذلك ، فإن تلطيخ كوماسي أقل حساسية من تلطيخ الفضة.
يسرد الرسم البياني أدناه الاختلافات بين Coomassie وتلطيخ الفضة في شكل جدول للمقارنة جنبًا إلى جنب.
ملخص - Coomassie vs Silver Staining
لتصور البروتينات ، يمكن إجراء تفاعل كيميائي مرتبط بالبروتين أو تفاعل كيميائي ينتج اللون. وهذا ما يسمى تلطيخ البروتين. Coomassie وتلوين الفضة طريقتان تستخدمان في تلطيخ البروتين. تستخدم تقنية تلطيخ كوماسي صبغة زرقاء لامعة كوماسي بينما يستخدم تلطيخ الشظية صبغة فضية. إذن ، هذا هو الفرق الرئيسي بين Coomassie وتلطيخ الفضة.
