الفرق الرئيسي - الشمالية مقابل الجنوبية مقابل الغربية النشاف
اكتشاف تسلسل معين من الحمض النووي ، والحمض النووي الريبي ، والبروتينات أمر ضروري لأنواع مختلفة من الدراسات في البيولوجيا الجزيئية. الرحلان الكهربائي للهلام هو تقنية تفصل بين الحمض النووي ، والحمض النووي الريبي ، والبروتينات وفقًا لأحجامها. من ملفات تعريف الهلام ، يتم الكشف عن تسلسل DNA معين أو تسلسل الحمض النووي الريبي أو البروتين بواسطة تقنيات خاصة تسمى النشاف والتهجين باستخدام مجسات ذات علامات. هناك ثلاثة أنواع مختلفة من طرق التنشيف وهي الطريقة الجنوبية والشمالية والغربية. يكمن الاختلاف الرئيسي بين النشاف الشمالي الجنوبي والغربي في نوع الجزيء الذي يكتشفه من العينة.النشاف الجنوبي هو طريقة تكشف تسلسل الحمض النووي المحدد من عينة الحمض النووي. النشاف الشمالي هو تقنية تكشف تسلسل معين من الحمض النووي الريبي من عينة الحمض النووي الريبي. النشاف الغربي هو طريقة تكشف عن بروتين معين من عينة بروتين.
ما هو النشاف الجنوبي؟
تم تطوير تقنية النشاف الجنوبي بواسطة E. M Southern في عام 1975 لتحديد تسلسل DNA معين من عينة DNA. هذه هي أول تقنية نشاف تم إدخالها في علم الأحياء الجزيئي. لقد مكنت من اكتشاف جينات معينة من الحمض النووي ، وشظايا محددة من الحمض النووي ، وما إلى ذلك. هناك عدة خطوات متضمنة في تقنية النشاف الجنوبي. هم على النحو التالي.
- يتم عزل الحمض النووي من العينة ويتم هضمه باستخدام نوكليازات مقيدة.
- يتم فصل العينة المهضومة بواسطة الاغاروز الكهربائي للهلام.
- يتم تغيير طبيعة شظايا الحمض النووي في الجل إلى خيوط مفردة باستخدام محلول قلوي.
- يتم نقل الحمض النووي المفرد الذي تقطعت به السبل إلى غشاء مرشح النيتروسليلوز عن طريق نقل الشعيرات الدموية.
- يتم تثبيت الحمض النووي المنقول على الغشاء بشكل دائم.
- يتم تهجين الحمض النووي الثابت على الغشاء باستخدام مجسات معنونة.
- يتم غسل الحمض النووي غير المرتبط من الغشاء عن طريق الغسيل.
- فيلم الأشعة السينية يتعرض للغشاء ويتم تحضير صورة شعاعية.
النشاف الجنوبي يطبق على جوانب مختلفة من البيولوجيا الجزيئية. إنه مفيد في رسم خرائط RFLP ، ودراسات الطب الشرعي ، ومثيلة الحمض النووي في التعبير الجيني ، واكتشاف الجينات المحورة في الاضطرابات الوراثية ، وبصمات الحمض النووي ، وما إلى ذلك.
الشكل 01: تقنية النشاف الجنوبي
ما هو النشاف الشمالي؟
النشاف الشمالي هو طريقة مصممة لاكتشاف تسلسل معين من الحمض النووي الريبي أو تسلسل الحمض النووي الريبي من عينة لدراسة التعبير الجيني. تم تطوير هذه التقنية من قبل Alwine و Kemp و Stark في عام 1979. وهي تختلف عن تقنيات النشاف الجنوبية والغربية بسبب عدة خطوات. ومع ذلك ، يتم تنفيذ هذه التقنية أيضًا عن طريق الرحلان الكهربائي للهلام ، والنشاف ، والتهجين باستخدام تحقيقات وكشف محدد. يتم تنفيذ تقنية النشاف الشمالية على النحو التالي.
- يتم استخلاص الحمض النووي الريبي من العينة ويفصل بينها بواسطة الرحلان الكهربائي للهلام.
- يتم نقل الحمض النووي الريبي من الجل على غشاء النشاف وثابت.
- يتم معالجة الغشاء بمسبار مُصنَّف مُعد من (كدنا) أو الحمض النووي الريبي (المسبار مكمل لتسلسل محدد في العينة).
- يتم تحضين المسبار مع الغشاء لربطه بتسلسل معين.
- تحقيقات غير منضم تغسل.
- تم الكشف عن شظايا هجينة بواسطة جهاز تصوير شعاعي.
النشاف الشمالي هو أداة مهمة في الكشف عن الرنا المرسال المهجن والقياس الكمي ، ودراسة تدهور الحمض النووي الريبي ، وتقييم نصف عمر الحمض النووي الريبي ، واكتشاف تضفير الحمض النووي الريبي ، ودراسة التعبير الجيني ، وما إلى ذلك.
الشكل 02: النشاف الشمالي
ما هو النشاف الغربي؟
النشاف الغربي هو طريقة للكشف عن بروتين معين من خليط بروتين باستخدام الجسم المضاد المسمى. لذلك ، تُعرف اللطخة الغربية أيضًا باسم اللطخة المناعية. تم تقديم هذه التقنية بواسطة Towbin et al في عام 1979 ويتم إجراؤها الآن بشكل روتيني في المختبرات لتحليل البروتين. الخطوات على النحو التالي.
- يتم استخلاص البروتينات من العينة
- يتم فصل البروتينات بأحجامها باستخدام البولي أكريلاميد الكهربائي للهلام
- يتم نقل الجزيئات المنفصلة إلى غشاء PVDF أو غشاء النيتروسليلوز عن طريق التثقيب الكهربائي
- يتم حظر الغشاء للارتباط غير المحدد بالأجسام المضادة
- ترتبط البروتينات المنقولة بالأجسام المضادة الأولية (الأجسام المضادة الموصوفة بالإنزيم).
- يتم غسل الغشاء لإزالة الأجسام المضادة الأولية غير المرتبطة بشكل خاص
- يتم الكشف عن الأجسام المضادة المربوطة عن طريق إضافة ركيزة واكتشاف الراسب الملون المكون
النشاف الغربي مفيد في الكشف عن الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية في عينة مصل الإنسان. يمكن أيضًا استخدام اللطخة الغربية كاختبار تأكيدي لعدوى التهاب الكبد B واختبار نهائي لمرض جنون البقر.
الشكل 03: النشاف الغربي
ما الفرق بين النشاف الشمالي الجنوبي والغربي؟
الشمالية مقابل الجنوبية مقابل الغربية النشاف |
|
| نوع الجزيء الذي تم اكتشافه | |
| النشاف الشمالي | النشاف الشمالي يكتشف تسلسل معين من الحمض النووي الريبي من عينة الحمض النووي الريبي. |
| النشاف الجنوبي | النشاف الجنوبي يكتشف تسلسل الحمض النووي المحدد من عينة الحمض النووي. |
| النشاف الغربي | النشاف الغربي يكتشف بروتين معين من عينة بروتين. |
| نوع الجل | |
| النشاف الشمالي | يستخدم هلام Agarose / الفورمالديهايد. |
| النشاف الجنوبي | يستخدم هلام الاغاروز. |
| النشاف الغربي | هذا يستخدم هلام بولي أكريلاميد. |
| طريقة النشاف | |
| النشاف الشمالي | هذا نقل شعري. |
| النشاف الجنوبي | هذا نقل شعري. |
| النشاف الغربي | هذا نقل كهربائي. |
| المجسات المستخدمة | |
| النشاف الشمالي | تحقيقات [كدنا] أو الحمض النووي الريبي المسمى إشعاعيًا أو غير إشعاعي. |
| النشاف الجنوبي | تحقيقات الحمض النووي مصنفة بشكل إشعاعي أو غير إشعاعي. |
| النشاف الغربي | تستخدم الأجسام المضادة الأولية كمجسات. |
| نظام الكشف | |
| النشاف الشمالي | يتم ذلك باستخدام جهاز تصوير أوتوماتيكي ، أو الكشف عن الضوء أو تغير اللون. |
| النشاف الجنوبي | يتم ذلك باستخدام جهاز تصوير أوتوماتيكي أو الكشف عن الضوء أو تغير اللون. |
| النشاف الغربي | يتم ذلك باستخدام الكشف عن الضوء أو تغير اللون. |
ملخص - الشمالية مقابل الجنوبية مقابل الغربية النشاف
النشاف هو تقنية خاصة تم تطويرها لتحديد DNA أو RNA أو بروتين معين من العينات.هناك ثلاثة إجراءات نشاف منفصلة ، وهي الشمالية والجنوبية والغربية ، للكشف عن نوع معين من الجزيء. تم تصميم تقنية النشاف الشمالية لاكتشاف تسلسل معين من الحمض النووي الريبي من خليط من الحمض النووي الريبي. تتيح تقنية النشاف الجنوبي الكشف عن تسلسل محدد للحمض النووي من عينة الحمض النووي ، وتم تطوير تقنية النشاف الغربي لتحديد بروتين معين من خليط البروتين.
